染色质免疫沉淀技术的应用及进展.pdfVIP

检验医学与临床 2009 年 3 月第 6 卷第 5 期 　L ab Med Clin ,March 2009 ,Vol . 6 ,No . 5 ·367 · 综述与讲座 染色质免疫沉淀技术的应用及进展 ( ) 杨 　舸 综述 ,朱 　静 审校 重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所心血管内科 　4000 14 　　【关键词】　染色质免疫沉淀技术 ; 　启动子 ; 　转录调控 ; 　DN A 微阵列 中图分类号 :R446 . 5 文献标志码 :A 文章编号 (2009) 　　真核生物细胞状态是受内源性和外源性因素共同影响的 , 抑制剂 ,低温下进行实验 。每次实验之前 ,首先考虑抗体/ 缓冲 真核生物的基因组 DN A 以染色质的形式存在 。所有信号传 液的比例 。 递途径的终点都是 DN A 。DN A 通过核蛋白复合物组成染色 2 　Chip 技术的应用及进展 质 ,染色质是基因调控的一个重要作用位点 。过去 10 年 ,染色 对免疫沉淀的DN A 的分析和蛋白质在 DN A 上结合位点 ( ) ( ) 质免疫沉淀技术 chromatin immunop recipit ation a ssay , Chip 的鉴定 ,可以从以下几方面实现 : 1 能够对下游的靶基因以及 已经成为进行表观遗传信息研究的主要方法 ,它可以灵敏地检 体外获得的同源 DN A 复合物的靶基因进行鉴别 ;用靶序列特 测 目标蛋白与特异 DN A 片段的结合情况 ,还可以用来研究组 异性探针与染色质免疫沉淀的 DN A 杂交来验证 目的蛋 白与 蛋白与基因表达的关系 ,有助于判断何种组蛋白修饰会出现在 DN A 靶序列的特异性结合 。其相对富集率可以通过比较探针 ( ) 细胞核中基因组的某一特定位置 。因此 , Chip 是 目前研究体 与特异性和非特异性抗体 即未免疫 的 Ig G 所免疫沉淀的 ( ) 内DN A 与蛋白质相互作用最好的方法 。 DN A 的杂交信号而测定 。 2 能够通过 Chip 分离出已知或新 1 　Chip 技术的原理 发现的未知调控原件的DN A 片段 。把免疫沉淀的 DN A 本身 Chip 结合 了抗原抗体反应 的特异性和 聚合酶链反应 作为 Sout hern 探针[3 ] ,将免疫沉淀的 DN A 用限制酶切后 ,与 ( ) ( ) PCR 的高灵敏性 ,可较真实地反映体内染色质与转录调控因 合适的接头 adap t er 相连 ,然后用与接头序列匹配的