念珠菌对氟康唑耐药性及其耐药机制的研究.pdfVIP

第五届华北地区；省两市植嘘医学学术会议论文汇编 附电泳原始图 bERIC．PCR 念珠菌对氟康唑耐药性及耐药机制研究 冯鑫张金燕 河北医科大学第四附属医院检验科 目的念珠菌为医院感染的主要致病真菌，由于抗真菌药的广泛应用，念珠菌感染所致的深部 真苗病逐年增加，氟康唑作为重要抗真菌药物之一，在临床上取得了良好的治疗效果，但耐药菌株 的出现也引起临床的重视。 本论文收垒临床耐药菌株，调查深部念珠菌感染的菌种分布和对氟康唑的耐药性，井对药物靶 制。为临床合理使用抗真菌药物提供实验室依据。 母菌纸片扩散法和E-Test法进行氟康唑药敏实验，保存对氟康唑耐药菌株。 ·l52- 第五届华北地区三省两市检验医学学术会议论文汇编 iim 采用PCR技术扩增白色念珠菌氟康唑靶酶基因的ERGll，测序后比较序列差异，研究基因点 突变与耐药表型的相关性；应用半定量RT-PCR技术，检测热带念珠外排泵基因MDRl表达量的差 异，研究耐药基因表达与氟康唑耐药的关系。 结果 1．两种念珠菌对氟康唑的耐药性分别为：白色念珠菌对氟康唑的耐药率为5％(5／loo)，热带 念珠菌对氟康唑的耐药率为8％(8／100)。 2．白色念珠菌耐药菌中产生ERGll基因的突变，其中lO个为有义点突变，15个为无义点突 变。lO个有义点突变的氨基酸分别为F72L、F105L、D1 康唑耐药的相关性。 3．本热带念珠菌耐药株主动外排泵基因MDRl的表达水平显著高于敏感株。 结论 1．本研究表明念珠菌在临床应用抗真菌药物中存在耐药性。 2．本研究表明念珠菌对氟康唑耐药机制与靶酶基因ERGl 1的位点突变和外排泵基因MDRl的 过度表达有关。 关键词念珠菌；氟康唑：耐药性；ERGll；MDRl 念珠菌是一种主要的人体条件致病菌，常寄居在正常人的皮肤、口腔、阴道和肠道。随着抗生 素和免疫抑制剂及侵入性治疗措施广泛应用，深部真菌二重感染及耐药现象日渐增多。如肿瘤、免 疫功能低下、长期卧床等患者，其念珠菌感染的机会更多。 氟康唑生物利用度高(90％)，副作用小，常被作为首选药物用于念珠菌感染的预防和治疗， 并取得了很好的效果。但由于氟康唑的不规范应用，使念珠菌产生了耐药性，耐药程度也越来越严 ·153· 第五届华北地区三省两市检验医学学术会议论文汇编 重，影响了临床治疗效果。因此，开展致病真菌的鉴定和体外药敏试验，指导l临床医生合理应用抗 真菌药物已受到越来越多的重视。 针对念珠菌对氟康唑的耐药机制的研究主要包括：①氟康唑作用的靶酶羊毛甾醇14a一去甲基 P450Lanosterol 化酶(C”ochrome 变化。②药物外排泵的过度表达。念珠菌与唑类药物相关的外排泵基因主要有两大类：一类为ATP cassette 结合盒转运子家族(AT／binding 子超家族(majorsuperfaeilitater)的多重耐药基因MDRl。 本课题对临床分离的白色念珠菌和热带念珠菌对氟康唑的耐药性进行检测，采用PCR技术检 测三唑类药物的作用靶酶基因ERGll及其突变情况，以研究白色念珠菌对氟康唑的耐药机制；采 用半定量RT-PCR研究热带念珠菌对三唑类药物的外排泵基因MDRl的表达情况。为临床合理使 用抗真菌药物提供实验室依据。 研究路线 ERGll基因PCR检测 MDRl基因半定量RT-PCR 1L 1L ERGll基因序列突变位点分析 MDRl基因的表达情况分析 对第