第九节 菊花的组织培养(二).docVIP

　　 菊花的组织培养（二） 主讲：黄冈中学优秀生物教师　王小敏 回顾上节课： 一、植物组织培养的原理； 二、植物组织培养的基本过程； 三、影响植物组织培养的因素。 四、实验操作 （一）制备MS固体培养基 1、配制各种母液：将各种成分按配方比例配制成的浓缩液。使用时根据母液的浓缩倍数，计算用量，并加蒸馏水稀释。 2、配制培养基：应加入的物质有琼脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有机物和植物激素的母液，并用蒸馏水定容到1000毫升。在菊花组织培养中，可以不添加植物激素，原因是菊花茎段组织培养比较容易。 3、灭菌：采取的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。 （二）外植体消毒 ? 　　冲洗→酒精→无菌水冲洗→氯化汞→无菌水冲洗至少三次之上。 （三）接种、培养、移栽和栽培 1、前期准备：用70%的酒精消毒工作台，点燃酒精灯。注意所有接种工作都必须在酒精灯旁进行，器械使用前后都要用火焰灼烧灭菌。 2、接种操作：接种过程中插入外植体时形态学上端朝上，每个锥形瓶接种7～8个外植体。 3、培养过程应该放在无菌箱中进行，并定期进行消毒，保持适宜的温度和光照。 4、移栽前应先打开培养瓶的封口膜，让其在培养间生长几日，然后用流水清洗根部培养基。然后将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中生活一段时间，进行壮苗。最后进行露天栽培。 ? 思考： 1、高等植物是光能自养型生物，为什么在植物组织培养过程中还需要提供有机物培养基？ 　　此时的组织或细胞是离体的，不能体现其整个植物体的光能自养，细胞所生活的环境必需是液体有机物的营养环境。 2、培养过程中为什么需要进行光照？ 　　该培养过程是一个脱分化、再分化的过程。再分化过程中，愈伤组织分化出芽和根需要光的诱导；随着芽和根的形成，幼苗就具有了光合作用的能力，幼苗的生长和发育需要光照。 3、在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？ ①培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌） ②外植体的消毒（酒精、氯化汞） ③接种的无菌操作（酒精、酒精灯——灼烧） ④无菌箱中的培养； ⑤移栽到消过毒的环境中生存一段时间。 五、结果分析与评价 （一）对接种操作中污染情况的分析； （二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化； （三）是否进行了统计、对照与记录； （四）生根苗的移栽是否合格。 实例：下面植物组织培养过程示意图中还有什么地方不够完善的？ 　　答案：没有进行灭菌处理，试管也没有做密封等。 1、污染的原因 　　污染：指在组织培养过程中，培养容器内滋生菌斑，使培养材料不能正常生长发育，从而导致培养失败的现象。 　　①细菌污染： 　　菌斑呈粘液状，界限比较明显，一般接种后1～2天即能发现。主要是大肠杆菌和链球菌。 　　②真菌污染： 　　菌斑呈绒毛状、絮状，界限不明显，伴有不同颜色的孢子。接种后3～10天才能发现。主要是霉菌污染。 2、污染的主要途径 3、污染的预防措施 六、植物组织培养的特点及应用 （一）植物组织培养特点 1、培养条件可以人为控制。 2、生长周期短，繁殖率高。 3、能保持亲本的优良性状。 　　除花药离体培养属于有性生殖外，其他都属于无性生殖。 4、管理方便，利于工厂化生产和自动化控制。 （二）植物组织培养的应用 1、快速繁殖、培育无病毒植株 　　运用组织培养的途径，一个单株一年可以繁殖几万到几百万个植株。例如一株兰花一年繁殖到400万株。 　　针对病毒对农作物造成的严重危害，通过组织培养可以有效地培育出大量的无病毒种苗。 2、制作人工种子，解决某些作物的繁殖问题。 3、远缘杂交：利用组织培养可以使难度很大的远缘杂交取得成功，从而育成一些罕见的新物种。 4、突变育种：采用组织培养可以直接诱变和筛选出具抗病、抗盐、高赖氨酸、高蛋白等优良性状的品种。 5、转基因植物的培育：基因工程主要研究DNA的转导，而基因转导后必须通过组织培养途径才能实现植株再生。 6、生物制品：有些极其昂贵的生物制品，如抗癌首选药物——紫杉醇等，可通过组织培养方式大规模生产。 课堂小结： ? - 返回 - 　　 同步测试 一、选择题 1、植物组织培养技术的理论基础之一是（　） A．植物细胞的完整性　　　　　　　B．植物细胞的多样性 C．植物细胞的全能性　　　　　　　D．植物细胞杂交 2、要大量繁殖用植物体细胞杂交方法获得的植物，应该采用哪种繁殖方式（　） A．种子繁殖　　　　　　　　　　　B．分裂生殖 C．出芽生殖　　　　　　　　　　　D．营养生殖 3、下列关于愈伤组织的说法中不正确的是（　） A．愈伤组织的细胞能够进行细胞分裂 B．用叶培养形成的愈伤组织细胞能够进行光合作用 C．培养愈伤组织的培养基中应含有有机养料 D．人们可以从愈伤组织中提取所需物质 4、在一个多细胞生物体内，存在形态、结构和生理功能上具有稳定性差异的细胞，是因为（　） A．细胞失去全能性 B