乙型肝炎病毒感染中耐药相关基因变异位点的动态分析及其与拉米夫定疗效的相关性研究.pdfVIP

医护论坛 乙型肝炎病毒感染中耐药相关基因变异位点的动态 分析及其与拉米夫定疗效的相关性研究 王娟，阚全程．余祖江 (郑州大学第一附属医院，河南郑州450052) 【摘要】目的：探讨拉米夫定治疗过程中乙型肝炎病毒耐药位点出现的变化规律，分析乙型肝炎病毒P基阂酪氨酸一 甲硫氨酸一天冬氨酸一天冬氨酸变异(YMDD)对拉米夫定疗效的影响。方法：收集接受拉米夫定治疗12个月的患者， 12个月HBV—DNA定量相对于给药前改变的百分比率作为评价拉米夫定疗效的指标。对部分治疗反弹的患者进行 HBV 定治疗过程中出现多位点变异，且P基因YMDD变异与拉米夫定耐药有关。 f关键词卜陉性乙型肝炎；拉米夫定；YMDD变异 【中图分类号】R516．6+2 【文献标识码1C 【文章编号1 本文通过对慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗前后 2结果 2．1HBV YMDD变异情况进行动态观察，考察YMDD变异对血清 P基因变异位点的动态分析 HBV—DNA载量的影响。为进一步合理选择抗病毒药物治疗 165例慢性乙型肝炎患者服用拉米夫定6个月后．有16例 乙型肝炎提供基础。 1资料与方法 1．1一般资料 选取本院2006～2008年门诊及住院的慢性乙型肝炎患 HBVDNA载量突破105 者165例，其中，男性87例，女性78例，无合并其它感染。所 copy／ml。对其P基因全序列测序发 有入选患者治疗前HBV—DNA定量大于105 现除YMDD发生变异外。B区或者C区其他位点也出现变 copy／nil。 1．2治疗方法 患者每El口服拉米夫定100 18l位点与214位点之间。 mg，持续治疗1年以上，分 别于用药前、用药的第6个月和第12个月采集患者外周静 2．2YMDD变异HBV—DNA定量的影响 脉血，用于检测肝功能，乙型肝炎病毒DNA载量和变异情 况。用第12个月时HBV—DNA定量相对于给药前改变的百 分比率作为评价拉米夫定疗效的指标。 1．06)后血清HBVDNA水平比较．差异有统计学意义(PO．05)， 1．3HBV—DNA定量和P基因变异的检测 且第12个月时血清HBVDNA水平明显高于第6个月(P主 抽取被检者静脉血2ml置于无菌离心管中。室温放置 不超过4h．离心．吸取上清备用。采用荧光定量PCR法测定的患者分为未变异组、第0～6个月变异组和第6～12个月变 血清HBVDNA的馈。采用HBVYMDD变异株PCR检测试 剂盒(上海宝生物科技有限公司)检测YMDD变异情况。部改变的白．分比例比较，差异有统计学意义(P=0．000)。未变异 分患者在第6个月时HBV—DNA应答，而在第12个月时出组HBV—DNA载量的改变比例明显高于变异组。而第嘶个月 现AIJT和HBV—DNA反弹，应用聚合酶链反应(PCR)扩增 其HBV—DNAP基因片段。反应条件为95℃5min，95℃30s， 影响拉米夫定抑制HBV—DNA复制的疗效．出现耐药，且变 57℃30s，72℃45s．72℃10min，PCR扩增产物于2％琼脂异f{{现越早，耐药越明显。 糖凝胶进行电泳，阳性结果在宝生物工程(大连)有限公司进 3讨论 行基阂测序。 拉米夫定是核苷类似物【11，对乙型肝炎病毒(HBVl的复 1．4统计学方法 制有很好的抑制作用121．然而拉米夫定长期治疗易产生耐药 采用SPSS15．0统计软件进行数据分析。计数资料以例 性，阻碍其进一步应用。一般来说，拉米夫定治疗1年耐药发 数和百分数描述，计量资料以元蚜表示。多组间计量资料的 生率为16％～32％。3。4年的耐药率可达49％一66％t31。 在本研究中服用拉米夫定6个月