实验芸香苷的提起.docVIP

实验九 槐花米中芸香苷的提取、分离与鉴定 【实验目的】 1.掌握碱溶酸沉法提取芸香苷的操作技术。 2.掌握以水为溶剂精制芸香苷的原理和方法。 3.了解芸香苷的鉴定方法。 4.了解酸水解法制备黄酮苷元的操作方法。 课型：实验课 课时：12学时 重点：碱溶酸沉法酸碱度的调节、控制。 难点：碱溶酸沉法酸碱度的调节、控制。 【实验材料】 槐花米、石灰乳、0.4%硼砂水溶液、浓盐酸、正丁醇、醋酸、氨水、乙醇、70%乙醇、1%氢氧化钠溶液、1%三氯化铝乙醇溶液、2%氯氧化锆甲醇溶液、2%枸椽酸甲醇溶液、10% -萘酚乙醇溶液、浓硫酸、2%硫酸溶液、葡萄糖标准品、鼠李糖标准品、芸香苷标准品、槲皮素标准品、碳酸钡、氨制硝酸银试液、广泛pH试纸、中速层析滤纸（4cm×15cm）。 【实验原理】 （一）芸香苷 又名芦丁（Rutin），维生素P，紫槲皮苷。分子式C27H30O16，分子量610.51。浅黄色针晶（水），mp.176℃～178℃， +13.82°(乙醇)，-39.43°（吡啶）。在各种溶剂中的溶解度为：难溶于冷水（1∶8000～10000）、可溶于热水（1∶200）、热甲醇（1∶7）、冷甲醇（1∶100）、热乙醇（1∶60）、冷乙醇（1∶650）、可溶于吡啶及碱性溶剂，几乎不溶于苯、乙醚、氯仿及石油醚等溶剂。由于分子中含有多个酚羟基，易被氧化，在空气中久置会使芸香苷颜色加深，尤其在碱性溶液中更易氧化。 （二）槲皮素（Quercetin） 又名栎精，槲皮黄素。分子式C15H10O2，分子量 302.23。为黄色针状结晶（稀乙醇），含2分子结晶水，在95℃～97℃成为无水物。mp.314℃（分解）。能溶于冷乙醇（1∶290），易溶于沸乙醇（1∶23），可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、冰醋酸及吡啶等溶剂，不溶于水、苯、乙醚、氯仿及石油醚等溶剂。 （三）其他成分 槐花米甲、乙、丙素（Sophorin A、B、C）、白桦脂醇（Betulin）、槐二醇（Sophoradiol）、单宁等。 本实验利用芸香苷分子结构中含有多个酚羟基，显弱酸性，能与碱作用生成盐而溶于碱水，加酸酸化后又能沉淀析出的性质，采用碱溶酸沉淀法进行提取。利用芸香苷在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质，用水作溶剂进行重结晶精制。 【实验内容】 一、芸香苷的提取 称取槐花米20g（压碎），加0.4%硼砂水溶液200ml，在搅拌下加石灰乳调节pH8～9，加热煮沸20分钟，随时补充失去的水分和保持pH8～9，倾出上清液，用四层纱布趁热过滤，滤渣同样操作再提取一次，过滤，合并两次滤液，放冷，用盐酸调节pH2～3，放置析晶，待全部结晶析出后，抽滤，用纯化水洗涤结晶，抽干，室温干燥，得芸香苷粗品，称重，计算收得率。 二、芸香苷的精制 称取粗品芸香苷2g，充分研细后置于烧杯加纯化水400ml，煮沸至芸香苷全部溶解，趁热抽滤，滤液放置析晶，抽滤，得芸香苷精品（若含杂质过多，可加入适量乙醇回流溶解，并加入约0.5%活性炭继续回流30分钟，抽滤，滤液放冷析晶，抽滤，得芸香苷精品）。置空气中晾干或于60℃～70℃下干燥，称重，计算收得率。 三、芸香苷的水解 取芸香苷1g，研细后置于圆底烧瓶中，加入2%硫酸水溶液80ml，加热微沸30分钟，待出现的鲜黄色沉淀不再增加为止，放冷，抽滤，保存滤液用于制备糖的色谱检识的供试液，沉淀物用纯化水洗至中性，晾干，得粗制槲皮素。再用70%乙醇重结晶得黄色小针状槲皮素结晶，晾干，称重，计算收得率。 四、芸香苷的检识 （一）化学检识 1.盐酸－镁粉反应：分别取芸香苷和槲皮素少许，分别用1～2ml乙醇水浴微热溶解，加入镁粉适量，浓盐酸数滴，观察并记录实验现象。 2.三氯化铝反应：将芸香苷和槲皮素的乙醇溶液分别点在滤纸片上，滴加1%三氯化铝乙醇溶液1滴，于紫外灯下观察荧光，并记录实验现象。 3.锆－枸椽酸反应：取芸香苷和槲皮素少许，分别用1～2ml乙醇水浴加热溶解，加入2%氯氧化锆甲醇溶液3～4滴，观察现象，然后各加入2%枸椽酸甲醇溶液3～4滴，观察并记录实验现象。 4.Molish反应（-萘酚－浓硫酸试验）：取芸香苷和槲皮素少许，分别用1～2ml乙醇溶解，加10%-萘酚乙醇溶液1ml，振摇后倾斜试管，沿试管壁缓缓加入约1ml浓硫酸，静置，观察二液界面颜色变化，并记录实验现象。 （二）色谱检识 1.芸香苷和槲皮素的纸色谱 色谱材料：新华中速色谱滤纸（4cm×15cm）。 展开剂：正丁醇－醋酸－水（4∶5∶1上层）。 供试品：实验产品1%芸香苷乙醇溶液与实验产品1%槲皮素乙醇溶液。 对照品： 1%芸香苷标准品乙醇溶液与1%槲皮素标准品乙醇溶液。 显色剂 ：①自然光下或置紫外光下观察。②喷洒1%三氯化铝乙醇溶液后，再于紫外光下观察荧光。