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2015-09-13 发布于重庆
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用2-△△Ct法分析real-time PCR数据 -----联合应用LightCycler Data Analysis软件和MS Excel By netmee，netmee@163.com 引用请注明作者。 1、打开存取的数据文件，点击 2、依次点击，，这是适合SYBR green为染料的选项。点击step1：Baseline下的“change graph settings”小图标。取消弹出的Customize Graph选项卡中的Logarithmis选项，点击“OK”按钮，退出选项卡。 3、点击下的“change graph settings”小图标，取消弹出的Customize Graph选项卡中的Logarithmis选项，点击“OK”按钮，退出选项卡。 4、在选项卡中拖动红色标记线，选取个条曲线都为直线上升部位。 5、可以在选项卡中观察是否需选取的是曲线直线上升部分。观察绿线部分与S型曲线交叉的部分是否为直线。 6、如果确为直线，则左侧的“Crossing Point”值为所需要的Ct值。 7、依次选取下图菜单：将数据导出为文本文件。 8、打开所保存的文本文件，如图选取 9、将数据粘贴入新建的excel文件，“Crossing Point”列即是Ct值，删除“Standard”和“Calculated Concentration”列。 10、将目的基因，本例中为“iNOS”的Ct值按标本对应剪切入beta-actin值右侧一列。分别标记两列数据为“beta-actin”和“iNOS”。 11、设置所有Ct值的单元格格式 12、数字选项卡，分类选择为数值，点击确定。 13、将E列（目的基因Ct值右侧一列）输入公式“=D4-C4”，求出目的基因与同管beta-actin Ct值之差，即△Ct。 14、向下拉复制公式，将△Ct列数值计算出。 15、在△Ct 列右侧一列插入公式“=POWER(2,(0-E4))”，此即目的基因相对beta-actin的相对表达量，即2-△Ct（2的-△Ct次方）。 16、在2-△Ct列右侧插入公式“=F4/$F$4”，此列即“2-△△Ct”列，复制公式填满所有标本对应的2-△△Ct空格。 17、至此，2-△△Ct法计算的各标本目的基因的相对表达量完成，2-△△Ct列的数据可以用统计软件进行分析。