综述人血内皮祖细胞.docVIP

陈君柱 人 血 中 内 皮 祖 细 胞 研 究 现 状 马 良 龙 综 述 黄 惠 民 审 校 上海第二医科大学附属上海儿童医学中心胸心外科 200127 摘要：人循环血液中存在内皮祖细胞，可以分化成内皮细胞和/或平滑肌细胞，其主要功能是参与血管新生。目前，确定内皮祖细胞还没有一个统一的标准， 相对认可为内皮祖细胞的是CD34、AC133和FLK-1等标志阳性细胞。内皮祖细胞在缺血性疾病治疗、血管组织工程、靶向药物治疗、肿瘤治疗等方面有广泛应用前景。本文总结近几年有关其来源、鉴定、分化、功能、应用等方面的文献。 关键词：内皮祖细胞 血管新生 组织工程 干细胞具有自我更新和多向分化潜能，分胚胎干细胞和成体干细胞。胚胎干细胞为全能干细胞，可以诱导分化成体内几乎所有类型细胞。而成体干细胞为多能干细胞，只能在一定刺激因子和特定的微环境下分化成几种细胞或具有特定功能的组织、器官。成体干细胞存在于骨髓、脐带血、外周血以及胎肝中。 由于受到伦理、法律及宗教文化等多方面问题的限制，胚胎干细胞的研究开展受到很大影响。而成体干细胞研究不存在这些问题，发展较快。目前干细胞临床应用最广泛和成熟的是骨髓移植和外周血干细胞移植，主要应用于血液病和各种恶性肿瘤引起的恶性贫血、免疫力低下等。其它方面的应用多处于实验研究阶段。在心血管外科，干细胞在组织损伤和缺损修复中的作用、在构建组织工程材料的应用是目前研究的重点。文献中多应用endothelial progenitor cells或angioblast/hemangioblast及endothelial procursor来描述最后发育成内皮细胞的前体细胞（1,2,3,4,5,6），一般翻译成内皮祖细胞、成血管母细胞、血液成血管细胞和内皮前体细胞。干细胞和祖细胞的特性为：干细胞具有自我更新和多向分化能力，具有“永生”特性，祖细胞只能在一定条件下分化成一种或两种特定细胞，没有自我更新能力，只能由干细胞的分化来补充其衰老死亡的细胞，属于过渡阶段的一种细胞，它不一定具有所有成熟细胞的标志，而且带有部分其它类型细胞的标志。除个别文献明确定义了内皮祖细胞（5）外，大多文献中并没有做到这一点。所以不同文献不同作者所提到的内皮祖细胞并不一定指的是同一类细胞。有作者（7）用同一种来源细胞，先体外培养扩增3周，后续培养采用不同方法先后培养出内皮细胞和平滑肌细胞。本文文献中所提到的细胞都属于此类细胞。由于骨髓采集需要麻醉且较痛苦，不易为人们接受，所以我们重点总结血液循环中内皮祖细胞存在证据、来源、分化、功能及应用研究等方面的文献。 1 外周血内皮祖细胞存在的证据 Moses Hong-De Wu等（21）报道一例65岁男性胸主动脉瘤患者，移植内径10毫米Dacron血管。26月后由于移植物周围巨大血清肿而行二次手术，取出移植的血管后经病理切片及内皮、平滑肌细胞标记鉴定证实，移植物内腔有平滑肌细胞、内皮细胞覆盖，而且远离吻合口血管翳范围。根据Fallout分析，移植物内腔被覆细胞来源有三种可能，即吻合口附近原血管壁细胞增生爬行、间质细胞内侵、血液中循环内皮祖细胞黏附增殖。此例由于巨大血清肿的存在，排除间质细胞内侵；远离吻合口血管翳除外吻合口附近原血管壁细胞爬行可能，因此断定移植物内腔被覆细胞来源于血液循环中内皮祖细胞。 Noel M.Caplice等（8）做过一组尸体解剖，所有尸体均为骨髓移植后存活超过一月后死亡者。在性别不符的有血管硬化发生的女性尸体，其血管病变处Y染色体阳性平滑肌细胞数是无血管硬化者的100倍。由于Y染色体阳性细胞只能来源于骨髓，据此推断，骨髓中的内皮祖细胞增生后进入血液循环，在某种因素影响下在病变部位黏附、增殖，参与血管硬化病变的形成。 在性别相配的骨髓移植病人（22），移植成功后5－20月取血样作外周血内皮祖细胞培养，用免疫磁珠选择法检测P1H12+细胞。体外培养4周后发现，早期的内皮细胞表型以受体为主，而后期以供体表型为主，而且供体表型细胞的增长能力超过受体表型细胞1000倍，说明血液循环中存在内皮祖细胞，来源于骨髓。 2 脐带血中内皮祖细胞存在的证据 无论是单纯分离单核细胞（5,20,27）,还是经过免疫磁珠筛选（5,16,20,30）细胞，脐带血在一定培养液和刺激因子存在下，经过一段时间培养后，镜下都出现梭形黏附型细胞，成群细胞排列呈鹅卵石样。内皮特异性标志VEGFR-2、VIII因子鉴定阳性，内皮细胞功能鉴定如ac-LDL摄取、eNOS分泌能力也证明为内皮细胞。这些实验均揭示脐带血中存在内皮祖细胞。而且脐带血中内皮祖细胞数量和扩增能力明显较成人血高。 3 内皮祖细胞的来源 如上所述（8,22）,血管移植物内腔被覆的内皮细胞、平滑肌细胞的来源有三种方式：即