反刍动物酶制剂的应用及体外评定研究.docVIP

反刍动物酶制剂的应用及体外评定研究 越来越多的研究表明，外源酶可以增加反刍动物饲料消化率，应用外源酶制剂可以作为提高反刍动物饲料利用率和生产性能的手段和方法（Beauchemin等，2003）。在20世纪90年代中期，对反刍动物酶制剂的研究逐渐展开，研究的重点主要是在日粮中添加酶制剂对反刍动物生产性能及血液指标等的影响，包括酶的种类、酶的添加量、添加方式等方面。由于奶牛具有复杂的消化系统，对反刍动物酶制剂的研究尚处在初级阶段，通过体内法很难阐明外源酶制剂的作用机理，导致许多研究成果不一致，没有形成令人信服的结论。据报道，很多因素影响酶制剂的应用效果，如酶的种类与性质、底物、添加水平等方面，故在使用之前应该对酶制剂的功效进行预测(Eun等，2007)。而仅仅依靠酶的生物学特征预测其在瘤胃内对纤维的降解程度是不科学的(Colombatto等,2003)，面对市场上种类繁多的酶制剂，通过动物试验验证酶制剂的功效是不可能，必须建立合理的体外方法来筛选酶制剂。体外产气法是评定反刍动物饲料营养价值常用方法，已经建立起用产气量等指标来预测饲料消化率的模型，并得到反刍动物营养学家普遍认可。通过测定纤维降解率和产气量等指标来筛选候选酶（Eun等，2005），虽然体外环境不能精确代表复杂的瘤胃内环境，但在筛选条件上比较容易控制，能直接研究某个因素对酶制剂作用效果的影响。体外法成本及劳动强度低，而且一次处理可以对多种候选酶进行评定。1 影响酶制剂作用效果的因素1.1 酶的种类及性质能降解植物细胞壁的酶制剂是在反刍动物中应用的研究重点。纤维素和半纤维素是构成植物细胞壁的主要结构，而木聚糖又是半纤维素的主要结构，所以以往的一些研究所用酶制剂大多是不同比例的纤维素酶和木聚糖酶组合成的复合酶(Beauchemin等,1999；Kung等，2000；Yang等，2000；Nowak等，2003)。Wallance等(2001)用6种外源酶制剂检测酶活与体外产气之间的相互关系（用干草和玉米青贮做底物），结果表明，纤维素酶活性和干草产气量之间存在着极强的相关性；酶活高的纤维素酶可以增加玉米青贮的产气量，相反，当木聚糖酶活性很高而纤维素酶活性很低时不能增加产气量。Eun(2007)报道，内切纤维素酶与苜蓿有机物质的消化率之间有高度相关性，基于这些研究，一些人猜想，提高纤维素酶的活性是最关键的（Beauchemin，2003）。但是Colombatto（2003）报道，木聚糖酶与苜蓿干物质降解率之间也有高度相关性，且与纤维素酶无关。木聚糖酶和纤维素酶混合使用效果要好于单一纤维素酶（Pritchard等,1996），许多真菌和细菌来源的纤维素酶和木聚糖酶在瘤胃中有协同降解纤维的作用(Fontes等，1995；Bhat等，2001),但在Eun(2007)的试验中没有发现这种协同效应。Nsereko等(2000)报道，木聚糖酶和酯酶协同能刺激苜蓿纤维降解，Colombatto(2003)指出一些木聚糖酶和蛋白酶能提高纤维的降解率。Colombatto等(2003)为了最大限度地降低饲料的复杂程度和组成成分，试验选择纯的燕麦木聚糖、纤维素和二者混合物为底物，在pH值6.8，温度20 ℃条件下测定了酶(主要含纤维素酶和木聚糖酶)对底物释放还原糖的量，结果表明，此外源酶可以增加燕麦木聚糖和混合底物还原糖释放量，从混合底物中释放出的还原糖主要来自木聚糖，占释放还原糖总量的56%，从纤维素中释放的还原糖甚微可以忽略，可能的原因是该酶含有较低的内切纤维素酶和葡萄糖苷酶或纤维素酶的活性在测定条件下被抑制，虽然纤维素酶不能从底物释放还原糖,但纤维素酶在纤维降解过程中发挥着重要作用,能够进入到纤维空隙中,破坏晶体纤维素的结构（Kerley等，1988）。Banka（1998）从里氏木酶发酵的上清液中纯化了一种低分子量蛋白(11.4 kDa),这种蛋白可以破坏滤纸的结构，但是不分解底物产生还原糖。他认为这种蛋白能够破坏氢键，使纤维素结构变得松散，弱化了晶体纤维素，为微生物快速附植和降解纤维创造新的位点。不同微生物所产生酶制剂的性质不同，即使是同一种微生物的不同加工工艺酶的性质也不同，外源酶制剂并不是单一酶制剂，是由不同比例的各种酶构成，如纤维素酶是由外切纤维素酶、内切纤维素酶、β-葡萄糖苷酶组成，纤维在3种酶的协同作用下逐步水解，同样，木聚糖酶在β-木聚糖酶和β-木糖苷酶的协同下水解木聚糖。不同的纤维素酶或木聚糖酶的各组分的比例不同，可能会导致其性质有很大的差异。1.2 底物不同底物的细胞壁结构不同，故同一种酶对不同底物的效果不同，即酶与底物有特异性。Beauchemin等（2000）用体外法评定26种酶制剂对苜蓿和玉米青贮干物质降解率的影响，26种酶制剂的生物学特征相似，在