第6章幼胚培养和离体授粉.pptVIP

* 第六章 幼胚培养 和离体授粉 6.1 胚培养概念和作用 6.2 离体配的发育途径 6.3 幼胚培养技术 6.4 影响胚培养的因素 6.5 胚培养应用实例 6.6 离体授粉 第六章 幼胚培养和离体授粉 1. 胚培养（zygotic embryo culture）的概念： 以合子胚为外植体的组织培养技术和应用。 胚培养分成熟胚培养和幼胚培养。两者在方法和应用上都有很大的不同 6.1 胚培养概念和作用 2.用途 幼胚培养：胚抢救、诱导产生胚性愈伤组织、产生次生胚状体、克服珠心胚的干扰； 成熟胚培养：诱导产生胚性愈伤、打破种子休眠、种子活性测定、兰花无菌播种、快速繁殖 6.1 胚培养概念和作用 1、合子胚发育过程： 合子 球形胚 心形胚 鱼雷形胚 子叶胚。 6.2. 发育途径 2.离体胚培养的发育途径： 萌发或早熟萌发（precocious germination）直接成芽； 脱分化成愈伤组织再分化。 6.2. 发育途径 早熟萌发 材料准备 外植体灭菌 幼胚分离方法 幼胚培养方法 培养基特点 6.3 幼胚培养技术 1. 材料准备：成熟胚材料比较容易获得，但做胚培养的材料需要合适的成熟度；幼胚的培养效果与幼胚的发育时期有很大的关系，所以要先搞清楚授粉后天数与发育时期的关系，采用人工授粉的办法，获得合适发育时期的幼胚。如果是培养远缘杂交的幼胚，则需要在胚乳退化之前分离幼胚。 6.3 幼胚培养技术 2. 外植体灭菌：一般采用灭菌胚珠（种子）或子房（果实，如兰花）的间接灭菌方法。直接对幼胚灭菌容易造成伤害。 6.3 幼胚培养技术 幼胚分离方法： 不分离：直接培养胚珠或种子（成熟胚）； 机械剥离：即在解剖镜下用镊子或解剖针剥离； 挤压法：单子叶植物的幼胚可以用镊子轻夹灭菌胚珠的胚的上方，挤出幼胚，马上接种到培养基上。 6.3 幼胚培养技术 幼胚培养方法： 固体培养：正常品种的幼胚可以在平板培养基上培养，通过调节激素以诱导胚直接萌发，或从幼胚组织中诱导愈伤组织； 胚乳看护培养：远缘杂交产生的幼胚有时在人工培养基上很难培养，自身胚乳退化的情况下，可以用双亲之一或第三个物种的胚乳做看护培养。 6.3 幼胚培养技术 培养基特点： 无机盐，Monnier培养基与MS培养基相比，K和Ca较高，NH4较低； 高浓度的蔗糖（8%－18）； 氨基酸和水解酪蛋白（CH）有利； 植物浸提物有时有用。 6.3 幼胚培养技术 基因型、 胚的大小、 胚乳的发育情况、 激素 6.4影响因素： 1、幼胚培养克服远缘杂交不孕性（embryo rescue）： 2、籼稻幼胚培养产生胚性愈伤： 3. 兰花种子发芽： 6.5 应用实例： 1、幼胚培养克服远缘杂交不孕性（embryo rescue）： 需要：种间、属间杂交，授粉正常，早期胚发育也正常，但胚乳退化造成不孕。 Laibach（1925）成功， Skirm（1942）Lilium henryi×L.regale。 Hordeum vultare×H. bulbosum产生单倍体胚乳也会退化。 6.5 应用实例： *