人角膜上皮细胞系的建立与其特性研究.pdfVIP

人角膜上皮细胞系的建立及其特性的研究1 1 1 1 1 1 1 1 王智崇 刘敬波 葛坚 宋革 黄冰 高楠 马萍 1 中山大学中山眼科中心眼科学国家重点实验室，广州， 510060 E-mail：wzc001@ 摘要： 目的 通过体外连续传代培养，建立具有正常生物学特性和功能的人角膜缘上皮细胞系， 为组织工程化角膜的构建提供种子细胞。方法 采用组织块法进行细胞纯化和扩增，建立角 膜缘上皮细胞系。①观察细胞在建系过程中的特征性形态变化；②通过MTT法绘制细胞生长 曲线，通过流式细胞技术进行细胞DNA倍体分析及周期检测，有限稀释法检测细胞的克隆形 成能力；③通过免疫组织化学、Western blot等方法检测建系细胞蛋白表达：包括转录因子 P63，角质蛋白CK3、CK19，CK14, 波形蛋白Vimentin, 微丝蛋白(F-actin)，微管蛋白(β -tubilin)，