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第22 卷 第6 期 辐 射 研 究 与 辐 射 工 艺 学 报 Vol.22, No.6 2004 年12 月 J. Radiat. Res. Radiat. Process. December 2004 用 HPRT 基因突变及 CBMN 研究 AT 细胞高辐射敏感性 罗加林 曹建平 朱 巍 刘芬菊 王明明 周献锋 朱财英 郑斯英 （苏州大学放射医学与公共卫生学院放射生物学教研室 苏州 215007 ） 摘要 研究了毛细血管扩张性共济失调症（Ataxia−telangiectasia, AT ）患者皮肤的成纤维细胞系AT5BIVA （AT 细胞）的高辐射敏感性。以源于正常人皮肤的成纤维细胞系GM0639 （GM 细胞）为对照，利用次黄嘌呤磷酸 核糖转移酶基因（Hypoxanthine phospho−ribosyl transferase, hprt ） 位点突变分析技术及胞质分裂阻滞微核法 （Cytokinesis−Block micronucleus method ，CBMN ），在AT 细胞和GM 细胞经60Co γ射线0、1、2 、3、4Gy 照射后，观察比较AT 细胞和GM 细胞之间hprt 基因位点突变频率（hprtMF ） 、微核率（MNF ）及微核细胞 率（MNCF ）的差异，并分别进行曲线拟合。在各剂量点，AT 细胞hprt 基因突变频率、微核率及微核细胞率 均明显高于GM 细胞，其差别具有显著性统计意义（p 0.01 ）；AT 和GM 细胞hprt 基因突变频率、微核率及 微核细胞率均与照射剂量呈正相关，可拟合成剂量效应直线方程y =a+bx 。结果表明，毛细血管扩张性共济失 调症患者AT 细胞辐射敏感性显著高于GM 细胞，具有高辐射敏感性。 关健词 毛细血管扩张性共济失调症，高辐射敏感性，次黄嘌呤磷酸核糖转移酶基因，胞质分裂阻滞微核法 中图分类号 X591 ，R114 毛细血管扩张性共济失调症（Ataxia− 1 实验材料和方法 telangiectasia, A−T ）是一种常染色体隐性遗传性疾 1.1 试剂及仪器 病，具有进行性小脑退化、高辐射敏感性、免疫缺 陷、基因组不稳定性、早熟和肿瘤高发病率等多种 DMEM 培养基（美国 Invitrogen 公司）；小牛 特殊临床表现。AT 突变（AT mutation ）基因编码蛋 血清（上海华美生物工程公司），细胞松弛素B （Cyt 白参与细胞周期调控、DNA 损伤信号传导及修复、 －B ）（美国Sigma 公司）；6−巯基鸟嘌呤（6−TG ） 染色体稳定性维持等过程，当细胞遭受电离辐射后 （美国Sigma 公司）；二甲基亚砜（上海硫酸厂）， 会启动 AT 突变激酶介导的信号传导途径以识别并 显微镜（Olympus ）。 修复损伤的DNA 。而在AT 患者成纤维细胞，ATM 1.2 细胞系和培养 基因突变所致的ATM 激酶活性丧失导致了AT 细 胞无法修复诸如辐射等损伤因子所造成的DNA 损 人成纤维细胞系 AT5BIVA 和 GM0639 （德国 伤，表现出了高辐射敏感性、染色体不稳定性等特 GSF 国家环境与健康研究中心放射生物实验室惠 征[1,2] 。本工作采用了hprt 基因位点突变分析技术及 赠）细胞分别接种于DMEM 培养基（含 15％小牛 胞质分裂阻滞微核法研究AT 细胞的高辐射敏感性。 血清和青、链霉素各100U ／mL ），在37℃、5%CO2 培养箱中培养。 hprt 基因定位于X 染色体长臂末端，是一个对电离 辐射非常敏感的位点，可简便、快速检测