实验真菌与实验考试复习.ppt

第九次 实验 病毒学检测（2）、病原性真菌 内容： 1、收获鸡胚尿囊液 2、病毒血凝试验 3、白假丝酵母菌G.S. 4、真菌在沙氏培养基上菌落观察 5、青霉菌菌丝、孢子观察 6、实验考试复习 鸡胚在孵育3～4d后取出，放4℃冰箱过夜 消毒气室端卵壳，撕去壳膜并撕破绒毛尿囊膜，以无菌毛细吸管吸取尿囊液（一般可收获4～5ml）置无菌试管中 进行病毒血凝试验，以测定是否有病毒生长及测定病毒血凝效价。 收获鸡胚尿囊液 病毒血凝试验 原理： 含有血凝素（HA）病毒，具有凝集鸡、豚鼠血红细胞的能力。把鸡红细胞加入到待检的鸡胚尿囊液和羊水中，如出现红细胞凝集现象，可作为病毒增殖的指标。如将病毒液做不同稀释，以血凝反应的最高稀释度作为血凝效价，可对病毒进行半定量检测。 方法： 摇匀，静置45min 结果 （凝集程度） 病毒血凝效价 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0.9 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 ② 病毒液 0.1 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 ③ 0.5%鸡RBC 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 弃0.25 ①NS（ml） 病毒稀释度 1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 - 0.5ml弃去 病毒血凝试验 效价管 1个凝集效价=106病毒颗粒 如血凝效价为1：160，则病毒液含病毒160×106 /ml 真菌（fungus）——是一类具有典型的细胞核和完整细胞器，不含叶绿素、无根、茎、叶的分化的真核细胞型微生物。 ㈠ 形态1、单细胞真菌 呈圆形或椭圆形，也称为酵母菌。 ⑴ 酵母型真菌：无菌丝，以芽生方式繁殖。 ⑵ 类酵母型真菌：芽生方式繁殖，延长的芽体形成假菌丝。 新生隐球菌 墨汁负染 10×40 白假丝酵母菌 革兰染色 10×100 2、多细胞真菌 孢子 生出嫩芽 芽管 延长成丝状 菌丝 不断生长分支、交织 菌丝体 菌丝为管状结构，内充满细胞浆 由菌丝和孢子组成，菌丝交织成团，故称丝状菌，又称霉菌。 多细胞真菌形态 孢子 菌丝 ㈡ 培养特性 培养基：常用沙保（sabouraud）培养基（蛋白胨、葡萄糖、氯化钠和琼脂） pH值：4.0～6.0 温度：22～28℃（深部感染真菌37℃） 时间：病原性真菌多为1-4w 需较高的湿度与氧 加抗生素抑菌 真菌菌落类型 1、酵母型菌落：是单细胞真菌的菌落形式，菌落湿润，柔软而致密。形态与一般细菌菌落相似。如新生隐球菌。 酵母型菌落 真菌菌落类型 2、类酵母型菌落：有部分单细胞真菌在出芽繁殖后，芽管延长不与母细胞脱离，形成假菌丝。假菌丝由菌落向下生长，伸入培养基，这种菌落称之。如白假丝酵母菌。 类酵母型菌落 3、丝状菌落：是多细胞真菌的菌落形式，由许多疏松的菌丝体构成。菌落呈棉絮状、绒毛状或粉末状。菌落可显出各种不同的颜色。丝状菌落的形态、结构与颜色常作为鉴定真菌的参考。 丝状菌落 墨汁负染色（新生隐球菌） 滴加墨汁+新生隐球菌 盖上盖玻片，高倍镜检 结果：背景黑色，菌体、荚膜不着色 荚膜 菌体 实验报告 1.实验目的、内容 2.病毒血凝试验原理、方法、 结果、结论、讨论。 实验复习、考试注意事项！！ 考试时按学号顺序，每次进10-12人 实验项目抽签决定，10min完成 满分10分（操作8分，回答问题1-2个共2分） 考试项目： 1、显微镜油镜的使用 2、细菌涂片制作 3、革兰染色 4、半固体、斜面接种 5、平板划线接种 6、玻片标本5个(写出名称) 1、葡萄球菌（革兰染色） 2、乙型链球菌（革兰染色） 3、肺炎链球菌（荚膜染色） 4、淋病奈瑟菌（革兰染色） 5、霍乱弧菌（革兰染色） 6、伤寒杆菌（鞭毛染色） 7、白喉棒状杆菌（Albert染色） 8、结核分枝杆菌（ 抗酸染色） 9、炭疽芽胞杆菌（革兰染色） 10、破伤风梭菌（芽胞染色） 11、狂犬病毒内基小体（HE染色） 12