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药物的量效曲线及pD2、pA2的求解 药理教研室：高分飞 目 的 掌握用温血动物离体器官求药物的量效曲线的实验方法。 观察乙酰胆碱（ACh）和阿托品（Atropine）的竞争性拮抗作用。 加深对受体学说中亲和力、内在活性概念的理解及掌握KD，Emax，pD2，pA2的概念及求算法。 常用概念 KD值：50％受体与药物结合时的药物浓度。表示药物与受体的亲和力。 KD越大，药物与受体亲和力越小。 Emax：药物的最大效应。增加剂量或浓度，效应不再继续增强。体现药物的内在活性。 效价强度（potency）：用于作用性质相同的药物之间等效剂量的比较。能引起等效反应的相对浓度或剂量。 常用概念 pD2：受体激动剂的受体亲和力指数，即受体激动剂引起最大效应的50％时所需剂量的摩尔浓度的负对数。 pA2：竞争性受体拮抗剂的拮抗指数，即用加倍浓度的受体激动剂，只引起原浓度的反应水平，这时所用拮抗剂的摩尔浓度的负对数。 原 理 ACh为M受体激动剂， 可引起肠平滑肌收缩， 在一定剂量范围内， 其收缩效应随剂量的加大而增强。 若以对数剂量为横坐标，以效应百分率为纵坐标作图，可得到S型量效曲线，据此可求得pD2； Atropine为M受体竞争性拮抗剂，可使ACh的S型量效曲线平行右移，根据公式可求出pA2。 方 法 本实验主要通过张力传感器, 利用与计算机相连接的BL-420生物机能实验系统, 观察、记录给阿托品前后ACh引起兔肠平滑肌肌张力（g）的变化，根据量效关系求解pD2 ，pA2 。 实 验 步 骤 一、实验准备： 用自来水冲洗麦氏液槽和贮液瓶三次后，加入台氏液，麦氏液槽加入台氏液40ml，在恒温浴槽中加入自来水至刻度。 打开恒温平滑肌槽开关, 设定温度 38oC，调节麦氏液槽通气泡量适宜。 二、固定肠肌： 离体空肠(富含M受体)制备（由实验员完成）。 取温台氏液约10ml于培养皿中，用小镊子取一肠段于培养皿中，两端夹上蛙心夹，一端连接于肌条固定夹于底部，另一端连接于张力换能器的旋臂。 冲洗肠肌三次，稳定10分钟。 三、计算机程序启动 开机，打开“BL-420生物机能实验系 统” 开关，将张力换能器的五心插口连接于1通（CH1），启动“BL-420”。 单击“设置” / “实验人员”，输入组号、名单，“确定”。 单击“文件” / “打开配置”，在弹出的“自定义模块选择”对话框中选“量效曲线”，“确定”。 双击“1通道”, 使1通道窗口全屏。 四、 ACh量效收缩曲线的记录 先记录一段肠肌收缩曲线约2cm，作为基线对照。 单击右下角的“L”, 打开特殊实验标记编辑对话框，在 “实验标记组列表” 中选 “量效曲线实验”，“确定”。 给ACh：按对数累加剂量给药。并及时做好给药标记。密切观察肠肌收缩反应，一般数妙至十几妙肠肌收缩达高峰，应在前一次收缩高峰刚下降时迅速加入下一个剂量。 ACh的给药次序 曲线完成，点击工具栏“‖”暂停，立即在10分钟内冲洗肠肌三次，然后加入10-6 M Atropine 0.4 ml，温浴15分钟。（同时可将曲线保存，以防微机故障） 肠肌温浴完毕，同样先记录一段肠肌收缩曲线作为基线对照。再以同法加入ACh，记录Atropine存在下的ACh量效收缩曲线，具体操作同上。 加Atropine后，ACh的给药次序 结束实验，点击工具栏“■”，在对话盒中输入文件名、保存。 调出保存文件，在工具栏点击“区间测量”按钮（绿色），测量给Atropine前后ACh量效曲线各浓度的肌张力（给药后张力减去基线张力），记录下来，填在实验报告上。 复制图形（必要时剪辑）并打印出来。 注意事项 勿过度牵拉肠管。 加药时勿滴在线及管壁上，应将药液直接滴在液面上。 加药时要及时、准确。 离体空肠标本与换能器的连线不要触及浴管壁。 KD、Emax、pD2的求法 量-效曲线的直线化 量-效曲线不便进行回归分析，通常采用以下几种方式予以直线化，借此可以由实测的各药浓度及药效强度来推算K及Emax。 1. Lineweaver-Burk双倒数法 2. Scott比值法 3. Scatchard比值法 4. Hill对数法 在Hill法中，斜率b就是1。因为Clark方程式的推导就是以b＝1为理论基础的，认为一个药物分子和一个受体结合而发挥作用。 但实际实验中发现，根据实验数据求出的b值并不都约是1，可远大于或小于1。认为药物与受体的关系比较特殊，不符合Clark基本方程式。认为Hill法中的斜率b还有一种含义，它反映了药物与受体间分子配合模式： 当b＝1时，[D] + [R] [DR] b＝2时，2[D] + [R] [D2R] …… b＝n时，n[D] + [R]