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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2011VOL．22NO．3 时珍同医国药2011年第22卷第3期
用亲和层析分离纯化短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白
黎渊弘1，罗艳萍2，廖共山2。
4B凝胶
捅要：目的用亲和层析法分离纯化短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白(PBAP)。方法利用溴化氰活化的Sepharose
C一25阳离子交换柱层析，CNBr—activated4B亲和柱层析和
偶联抗体构建亲和层析柱，通过CM—Sephadex Sepharose
SephacrylS一200凝胶过滤柱层析分离纯化PBAP。结果利用多克隆抗体偶联溴化氰活化的Sepharose4B成功构建亲和
层析柱，分离纯化得到PBAP。结论利用亲和层析法分离纯化PBAP，具有简单、快速的特点。
关键词：磷脂结合抗凝蛋白； 多克隆抗体； 亲和层析
DOI标识：doi：10．3969／j．issn．1008-0805．2011．03．056
中图分类号：R927．2；R986文献标识码：B 文章编号：1008-0805(2011)03-0639-02
ml
我国蛇类资源丰富，蛇毒其主要成分是蛋白质，其中不少毒 上清液；用50 0．1 mol·L。1
tool·L～NaHC01，pH8．3，含0．5
性蛋白如L一氨基酸氧化酶、磷脂酶A，、5一核苷酸酶、类凝血酶、 lIll(25．21
NaCI的交联缓冲液洗涤平衡，重复操作两遍。吸取8
纤溶酶等影响凝血功能包括血液凝固、纤溶系统、血小板聚集。
黎渊弘等1。从短尾蝮蛇毒中分离纯化出磷脂结合抗凝蛋白，并 0．1tool·L～NaHCO，，pH8．3，含0．5
对其理化性质、动物体内外的抗凝。、抗栓作用3：、血液流变学 析)与上述平衡好的CNBr—activated4B混合，室温放
Sepharose
的影响4、作用机制5以及基因克隆6进行了研究。 置1h，期间用玻璃棒慢慢搅动，然后放置4屯冰箱，搅拌数次．反
应过夜。用20
本研究改进了分离纯化技术．采用亲和层析法纯化短尾蝮蛇 ml交联缓冲液洗涤多余的短尾蝮蛇毒PBAP多克
ml0．1
毒磷脂结合抗凝蛋白，为进一步的深入研究该蛋白，制备新型抗 隆抗体，重复操作5遍，加入50
tool·
血栓制剂的临床试验提供实验依据。 pH8．0的终止缓冲液静置2h，终止残留活性组分。用0．1
l mol·L。1 mol·L～Tris—
材料与仪器 4．0，含0．5 NaCI和0．1
L～NaAc，pH
1．1原材料短尾蝮蛇蛇毒冻干粉，广西医科大学蛇毒研究所提HCI，pH8．0，含0．5
供。 次洗涤各100ml。
C一25、CNBr—activated4B、2．
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