多枝赖草高分子量核DNA的有效制备.pdfVIP

草韭科学 24卷j0期 PRATA【、uLrURALSCIENCE Vol24．No10 多枝赖草高分子量核DNA的有效制备 周玉雷1，徐粤宇2，赵茂林3，曹致中1，王志平4 (1甘肃农业大学草业学院，H肃兰州730070；2酋都师范大学生命科学学院，北京100037； 3』匕京市农林科学院农业生物技术研究巾心，北京100089；4北京市上肥T作站．北京100029) 提缓冲液，经一系列钢制细胞筛过滤，离心分离细胞柱，相差显微镜镜检后，用低熔点琼脂耱包埋，蛋白酶K 原位裂解，经脉冲场电泳分离，用1％低熔点琼脂糖回收获得了较纯净的分子量大于2Mb的核DNA， Southern杂交显示没有叶绿体和线粒体DNA的污染 利用谚方法制备的高分子量核DNA，可用于后续可 转化人工染色体(TAC)文库的构建和基因组分析。 关键词：多枝赖草；高分子量核DNA}脉冲场电泳 05 中固分类号：$S43+．g；Q78I文献标识码：A 文章编号：100卜0629(200，)i0—0052 multicaulis(2n=4X一28， 多枝赖草Leymus 人工染色体(TAc)基因组文库构建及筛选利用。 XmXmNsNs)隶属赖草属，多年生，是我国新疆重1材料与方法 要天然牧草，被牧民认为是头等优良的饲用禾 1．1材料样品是大田试验小区中修剪留茬 草”]。它分布于盐渍化荒漠草旬，目前已被证实 1～3cIn的经报纸覆盖黄化的多枝赖草阿生苗的 具有突出的耐干旱、耐盐碱、耐黄矮病、耐蚜虫、耐 幼嫩茎叶，用冰盒取回后，在液氮中研磨成粉状存 瘠薄、耐污染等优异抗逆特性。2’…，可以为小麦遗 于EP管中，放一80℃冰箱中保存备用。 传改良提供丰富的基因资源“]。为了分离得到上 1．2试验方法 述优良基因，准备构建多枝赖草大片段基因组文 1．2．1细胞核分离根据Liu等【“的程序分离细 库，而高纯度、高质量的大分子餐(HMW)核 胞核，并作部分优化：取25g多枝赖草黄化苗的 DNA的获得，又是对基因组进行分析和构建大片 幼嫩叶片粉末，加人到250mL冰上预冷的核抽 段基冈组文库的前提[5]。前人通过低熔点琼脂糖 提缓冲液[Iommol／L mmol／L 包埋完整细胞核和脉冲场凝胶电泳的方法已经获 EDTA(pH值8．0)，100mmol／1，氯化 钾，O．5mol／L蔗糖，4．0mmol／L亚精胺，1．0 得了高粱“oSorghumbicolor，拟南芥Arabidopsis thaliana和水稻D…Oryza sativa，番茄”3LycoP— 匀，冰浴】0 ersicon aestivum，玉 esculenlMm，小麦“…Triticum 经75％酒精洗涤、过紫外灭菌的钢制细胞筛，滤 米Zea mnz、苹果”“11]Malus mays、大豆Glycina 000 salic— 液分装入冰上预冷的50rnl．离心