感受态细胞制备技术的研究进展.pdfVIP

2013年第1期 中 国 甜菜糖业 2013No．1 2 1 0 3年3月 cHINABEET＆SUGAR Mar．2013 文章编号：1002—0551(2013)01—0021—04 感受态细胞制备技术的研究进展 夏鹤鸣，张波，乔磊，杨玉波，徐德昌+ (哈尔滨工业大学食品学院科学工程学院，哈尔滨150090) 摘要：本文主要介绍感受态细胞的概念以及简要叙述该技术的发展史，目前人们掌握获取感受态细胞的 有很多方法，本文将列举几种制备感受态细胞的方法，并说明各种方法的特点。感受态细胞制备完成后要 经过转化才可进行后续的试验，所以文中对于感受态细胞转化的影响因素进行了阐述。最后，列举近年来 研究人员在这一领域取得的进展并展望未来这一领域。 关键词：感受态细胞；制备方法；影响因素 中图分类号：S566．3 文献标识码：A 离子中暴露更长时间，加入DMSO、还原剂、氯化六 0引言 氨合高钴等处理细菌等，都可使转化率大大提 古[1] 问 o 随着分子生物学的迅猛发展，人们开始重视基 1．2感受态细胞的制备方法 因操作的重要意义，将DNA重组体导人合适的受 感受态细胞的制备目前共分为两类，即物理方 体细胞便能大量地复制、增殖和表达，从而得到大 法和化学方法。以下便介绍几种常见的感受态细 量的重组基因。一般来讲，外源DNA与载体重组 胞制备方法。 后形成的重组DNA很难穿透细胞的内膜与外膜进 入细胞进行复制，增殖与表达，这时，我们需选取适 养好的平板中挑取单菌落，装人称有5mlLB液体 合的受体细菌，通过物理或者化学的方法达到让受 管中，在37℃的温度下震荡摇匀，放置过夜，选取 体具有接受外源DNA的能力。 种子液1m1种子液加人100mlBL液体培养基中，采 取保温培养的方式，培养到对数生长中期，菌液经 1感受态细胞的制备 过冰水浴后，通过离心机以4000r／min离心，将之 前与种子液混合的LB溶液进行预冷，取1mlLB溶 1．1 感受态细胞制备方法的发展 液轻轻重悬细菌，后加人5mlLB液体培养(含 最初人们用简单的盐溶液鸡尾酒法洗涤大肠 mmol／L PEG6000、12 360ml／L甘油、1209／L Mg— 杆菌使其处于感受状态，DNA可以进入细胞。 SO。)轻轻混匀，放于4℃或一20℃环境中备用。其 Mande和Higa在1970年提出用预冷的CaCl：溶液 mmol／L 中LB液体培养基是由10 MgCl2，29／L葡 处理细菌，短暂加热后，入噬菌体DNA可转染细 萄糖配置而成的。 菌。用同样的处理方法，Cohen以质粒DNA、Oishi 这种方法的特点是在一30℃的条