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中国农业科学 2011,44(9): 1931-1938 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.09.021 猪干扰素α 和γ 在杆状病毒中共表达及对PRRSV 抑制作用 王彦彬，孙向丽，魏战勇，陈红英，杨明凡，崔保安 (河南农业大学牧医工程学院/河南省动物性食品安全重点实验室，河南 郑州450002) 摘要：【目的】制备复合型猪干扰素α和γ进行应用抗病毒研究。 【方法】本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒 /昆虫细胞表达系统,将编码猪干扰素α和γ成熟蛋白基因插入供体质粒pFastBacDual，分别置于PH和P10 启动子 控制下，引入蜂素信号肽（honeybee melittin signal peptide, HBM）基因取代猪干扰素α和γ原有信号肽基因 以实现分泌型表达，并在C端分别融合 6 个组氨酸标签以利于纯化。将构建质粒转化DH10 感受态细胞进行同源重 组，获得重组穿梭质粒Bacmid，转染对数生长期的Sf9 昆虫细胞获得重组杆状病毒。重组杆状病毒感染昆虫细胞， 鉴定重组蛋白的活性。 【结果】通过间接免疫荧光、Western-blot证明猪干扰素α和γ重组蛋白在重组杆状病毒 感染的昆虫细胞中均获得表达，表达产物主要分布在培养上清中。通过在猪肾细胞（PK-15）上抑制水泡性口炎病 毒（VSV）致病变作用检测重组蛋白的抗病毒活性，结果表明：昆虫细胞上清的抗病毒效价达到3.24×107 -1 U·mL 。 在Marc-145 细胞，昆虫细胞上清经2-11稀释能够抑制 100 个TCID 的PRRSV的致细胞病变作用。 【结论】应用杆状 50 病毒表达系统实现猪干扰素α和γ在昆虫细胞上分泌共表达，重组蛋白在细胞上对PRRSV具有抑制作用。 关键词：猪；干扰素；杆状病毒；表达；繁殖与呼吸综合征病毒 Co-Expression of Porcine Interferon-Alpha and Interferon-Gamma Using a Baculovirus and Its Inhibitant Activity on PRRSV WANG Yan-bin, SUN Xiang-li, WEI Zhan-yong, CHEN Hong-ying, YANG Ming-fan, CUI Bao-an (College of Animal Science and Veterinary Medicine,Henan Agricultural University/Key Laboratory of Animal-Derived Food Safety of Henan Province, Zhengzhou 450002) Abstract: 【Objective 】Compound recombinant porcine interferon α and interferon γ were prepared for clinical antiviral investigation 【Method 】 Nucleotide sequences encoded mature porcine interferon-alpha and interferon-gamma were cloned and inserted into pFastBacDual under the contr