24孔无血清ifectDNA转染方案.docVIP

ifectDNA 24孔无血清转染方案 1. 接种细胞。转染前24小时将细胞接种24孔板内。接种约80000个细胞每孔。要求细胞融合度70-80%。 2.准备质粒。0.5ug质粒加到无血清培养基(DMEM)至25uL，混匀。 3.准备试剂。2ul的ifectDNA加到成无血清培养基(DMEM)至25ul，混匀。 转染效果优化非常重要：为保证在最低的细胞毒性条件下获得最高转染效率。我们建议首先是按照表1来设定细胞量和浓度。您还可以通过改变质粒和转染试剂比例来优化你的转染效率。预实验可以设置试剂梯度，包括(0.5ug-25ul)/(2ul-25ul), (1ug-25ul)/(4ul-25ul)组合，取得最佳转染效果。尽量控制质粒DNA/转染试剂比例，1ug ：4ul 4.配置试剂。快速将转染试剂溶液加入到质粒DNA溶液中。轻轻混匀成50ul混合液，室温静置5分钟。 5.转染细胞。吸尽培养板内的培养液，每孔换为200ul无血清培养基。 加入50ul质粒-ifectDNA试剂混合液至24孔板每孔内，置于37°二氧化碳培养箱孵化3-6小时。 6. 转染完成。孵化完后，加入250ul含20%血清培养基（无抗生素）至每孔，（保持每孔的血清培养基最 终浓度为10%）。（除非毒性太大，一般不换液） 继续在37℃二氧化碳培养箱孵化48小时以上。 7. 孵化48小时之后，检测基因转染效果。 表1. 推荐试剂使用量，可以根据此表基础进行优化 细胞培养装置 表面积(cm2) 每孔总体积 (?l) 每孔质粒 ( μg) 每孔ifectDNA试剂量 (?l) 6- well 9 1000 2 8 12-well 4 500 1 4 24-well 2 250 0.5 2 96-well 0.3 100 0.05-0.1 0.2-0.4 注意： 1. 孵化3-6小时之后，一般不建议换液，因为ifectDNA为非脂质体化合物，经过血清抚育，毒性很低，可以取得更大的转染效率。如果确实发现细胞耐受性不好，考虑换液，用新鲜的培养基取代。 2. 该说明为一个孔的用量，同时转几个孔时按需加倍