7300荧光定量PCR仪标准操作规程.pdfVIP

7300 荧光定量PCR 仪标准操作规程 生产厂家：美国ABI ， 一、仪器操作 1、开计算机 开主机电源 双击ABI Prism 7300 SDS 软件。 2 、在 New Document Wizard 窗口中选择 Assay 等 3、设定完成后按下 Next ，选择 Detector 按下 Add 将Detector 加入 Plate Document 按 下Next 。 如要设定新 Detector 则按下New Detector 选择新Detector 。 4 、选定 Plate Document 中放样品的 Wells 后 选定适当的Detector ，击Detector 列中的 Use 框 从Task 栏中选择种类：Unknown 、 NTC 或 Standard 。5、输入样品名称可从 View 列 中选择 Well Inspector 。 同名称者，软件即视为重复样品，会自动计算平均值及标准偏差。6、 若此 Plate Document 常用，可将其存成 Template 。从File menu 下选 Save As ，输入文件名并存成 SDS Templates (*.sdt) 格式。 7、 若不存成 Template ，则先存下此 Plate Document 从File 下选 Save As ，并将档案种类 存成 SDS Document (*.sds) 格式。 8、 检查 PCR 条件，将样品盘放入机器中，并准备收集 data 。 在 Plate Document 上击Instrument ，进入 PCR 设定窗口。 若要更改温度及时间，可击 Add Cycle, Add Hold 或 Add Step ；若为 SYBR 的反应，则击 Add Dissociation ；收集讯号可在 Results 下击 Amplification Plot ，收集过程中可同步观察 Amplification Plot 。9、再存一次后，按下 Start 即开始进行 PCR 及讯号之收集。 10、 结果分析：收集data，检视 Amplification Plot 或其它 data 。 若 data 已分析完成，在 Amplification Plot 中 Threshold 为綠色线；红色线表示未分析。 输出或列印结果：若 data 有问题时，可检视 Spectra 或Component data，设定 baseline 及 threshold ，重新分析。 二、注意事项:1. 在 ABI 7300 上可使用 96 well plate 或单一的 PCR tube ，当使用单管的 tube 时可直接上机或配合 tray/retainer 一起使用。 2. 管子及盖子上请勿标记任何记号，以免墨色脱落，沾到 PCR block 上增加背景值。 3. 定期以棉花棒沾超纯水清洁 PCR block 以增加侦测灵敏度。 4. 为确保机器侦测的灵敏度，每月重新 run 一次 background plate