烟草遗传转化体系的建立.docVIP

本 科 生 毕 业 设 计（论文） （ 2015届 ） 农业与食品科学学院 题 目： 烟草遗传转化体系的建立 学 号： 姓 名： 专业班级： 2015 年 5 月 18 日  本科生毕业设计（论文）诚信承诺书 我谨在此承诺：本人所写的毕业设计（论文）《烟草遗传转化体系的建立》均系本人独立完成，没有抄袭行为，凡涉及其他作者的观点和材料，均作了引用注释，如出现抄袭及侵犯他人知识产权的情况，后果由本人承担。 承诺人（签名）： 年 月 日 目录 本 科 生 毕 业 设 计（论文） 封1 本科生毕业设计（论文）诚信承诺书 封2 1 前言 1 1.1 农杆菌介导法 1 1.2 基因枪法 2 1.3 PEG法 2 1.4 显微注射法 2 2 材料与方法 3 2.1 试验材料 3 2.1.1 植物材料 3 2.1.2 菌株和质粒 3 2.2 试验方法 3 2.2.1 农杆菌的制备 3 2.2.2 叶片表面消毒 3 2.2.3 预培养-侵染-共培养 4 2.2.4 特美汀对农杆菌的抑制作用 4 2.2.5 芽分化-卡那霉素浓度的测定 4 2.2.6 根分化 4 2.2.7 炼苗-移栽 5 2.2.8 转基因植株的分子鉴定 5 3 结果与分析 6 3.1 农杆菌菌液侵染时间对转化效率的影响 6 3.2 共培养时间对转化率的影响 7 3.3 特美汀对根瘤农杆菌的抑菌效果 7 3.4 卡那霉素浓度对烟草叶片外植体出愈率的影响 7 3.5 转基因植株的分子鉴定 8 4 讨论 8 参考文献 9 致谢 11  烟草遗传转化体系的建立 农业与食品科学学院 农学111 吴春盛 指导教师：郑志富 摘要：利用农杆菌介导的转化法获得转基因植物,这是研究目的基因功能的一种有效方法。本研究将通过探索农杆菌的浸染时间、共培养时间、不同度浓度的特美汀抗生素抑制农杆菌的效果以及不同浓度的卡那霉素（Kan）影响抗性芽分化等因素对烟草K326叶盘转化率的影响,建立一种稳定、高效的烟草K326遗传转化体系。 关键词：烟草；组织培养；农杆菌；遗传转化 Eestablishment of a Tobacco Genetic Transformation System Abstract: Using agrobacterium-mediated transformation to genarate transgenic plants is an effective way to study gene function. This study was aimed to investigate the factors influencing the efficiency of tobacco leaf disc-based transformation, including the infection time of Agrobacterium, co-cultivation time with Agrobacterium, various concentrations of timentin with inhibitory effects on Agrobacterium growth, and different concentrations of Kanamycin (Kan) affecting differentiation rates of the resistant buds in attempt to establish a robust and efficient genetic transformation system of Nicotiana tabacum L. cv K326. Key words: Nicotiana tabacum, Tissue culture, Agrobacterium, Genetic transformation 1 前言 所谓遗传转化，是指通过自然或人工感受态细胞的摄取，将同源或异源的游离DNA分子(质粒和染色体DNA分子)转入受体细胞或组织中，并在后代中表达基因特性的基因转移过程。根据感受态细胞的构建方式，遗传转化可以分为自然遗传转化和人工转化两种，其中，自然遗传转化的感受态细胞的出现