电针对脑缺血再灌流抗氧应激MAPK信号转导的作用.pdfVIP

第十五届针灸对机体功能的调节机制及针灸临床独特经验研讨会暨第十一届针灸经络学术研讨会论文集 电针对脑缺血再灌流抗氧应激MAPK 信号转导的作用 李忠仁,沈梅红,牛文民 (南京中医药大学,江苏 210029) 【摘要】 目的 探索电针调节脑缺血再灌流脑组织损伤抗氧应激信号转导途径。方法 将 90 只清洁 SD 雄性大鼠,采用 LONGA 血管改良内线栓法,制成脑缺血/缺氧再灌流氧应激大鼠模型,随机分为6 组。正常组(Normal)10 只;模型组(MCAO Model)16 只;电针组(EA)16 只,模型加电针“百会”“大椎”穴;假手术组(Sham)16 只;EA ＋MAPK 的阻滞剂PD98059(2.78 mg/kg)16 只;EA ＋MELATONIN 的拮抗剂Luzindole 组16 只(2.78mg/kg),电针穴位为大鼠“百会”、“大椎”两穴,30 号1 寸毫针,接上海医疗仪器厂G6805 电针仪的正负电极,刺激参数为疏密波,频率80～100 Hz,强度 1～3 mA,电压1～3 V,留 针60 min 。对照性观察各组大鼠神经行为学评分、免疫组化法测定缺血再灌流大脑皮层、纹状体ERK 阳性细胞数、皮层锥 体ERK 阳性神经元细胞蛋白含量变化及表达的影响。结果 电针可使脑缺血再灌流应激损伤大鼠神经行为学评分改善、脑 皮层及纹状体组织ERK 阳性免疫细胞数量表达增加,阳性细胞蛋白含量体视学参数的面密度、数密度显著提加(P ＜0.01)。 而 EA ＋MAPK ＋PD98059 平均吸光度显著下降(P ＜0.05),模型组平均灰度显著增加(P ＜0.01,P ＜0.05)。Luzindole 与 PD98059 阻滞剂可部分地阻断或削弱电针抗氧应激的效应。结论 电针可逆转由于脑缺血、缺氧再灌流所造成自由基连锁反 应及氧应激状态,达到抗氧应激和脑神经元的保护作用,电针对大鼠脑缺血再灌流损伤的抗氧应激,可能与MAPKs 信号转导通 路密切相关;强天然抗氧化剂-MLT 参与了这一过程。MAPK 信号通路极可能是氧化还原敏感信号转导途径之一。但由于针灸作 用的多途径、多靶点的特性,抗氧应激是否还会存在其它信号转导的作用,值得我们下一步研究时探索。 【关键词】 脑缺血再灌注;电针;抗氧应激;MAPK ;MLT 【中图分类号】 R2-03 【文献标志码】 A 前期研究证明,针灸具有直接预防或间接阻断自由基反应的抗氧化作用及干预脑缺血神经元免受自由基损 伤的效应,针灸抗氧应激效应程度,又常取决于针灸对整体及局部抗氧应激环境的运转及自我生理调衡的机制。 研究中我们发现,针灸确能激发松果体强抗氧化剂(Melatonin)的释放及机体水或脂溶性抗氧化剂、抗氧化酶(脑 组织及核团GPx、CAT 活性酶及MDA 含量,血清SOD、SOD/MDA、NO/NOS 、GSH、GSH-PX 含量)的调节, 以达到调控阴阳,扶正袪邪,以平为期的目的。关键的问题是针刺抗氧化作用,究竟通过什么信号途径转导、调节 了哪些代谢环节、哪些神经递质、调质、激素、蛋白质信息参与了调节,并不清楚,也少见报道。为此,我们在国 家自然科学基金委重大项目资助下,深入开展了针刺抗氧化效应MAPK 信号转导和机制研究,现总结如下。 1 材料与方法 1.1 实验动物与分组 成年SD 8 月清洁级雄性大鼠90 只,体重(360±20) g,由南京中医药大学实验动物中心提供,自由摄食、进 水，25℃室温适应性喂养一周后实验研究。实验动物随机分为6 组。正常组(Normal)10 只,不作任何处理;模型 组(MCAO Model)16 只,制作大脑中动脉缺血再灌注模型;电针组(EA)16 只,模型加电针“百会”“大椎”穴; 假手术组(Sham)16 只,手术步骤同模型组,但不插入线栓;EA ＋MAPK 阻滞剂组16 只,模型加电针与ERK 的上游 激酶MAPK 的阻滞剂PD98059;EA ＋Melatonin 阻滞剂组16 只,模型加电针与MT2 受体拮抗剂Luzindole 。 1.2 脑缺血(MCAO)再灌注、氧应激模型的制备及评估 动物在 3%水合氯醛(1 mL/100 g 体重)麻醉下,取仰卧位固定在手术台上。常规清毒后,在颈部正中作一个 约2 cm 长的切口,钝性分离,充分暴露右侧颈动脉三角区。分离右颈总动脉及其颈内、外动脉,电灼凝固枕动脉 及甲状腺动脉,在远心端结扎右颈外动脉。然后,用动脉夹阻断右颈总动脉和右颈内动脉远心端。 在结扎处切断右颈外动脉使之游离,再将颈内、外动脉交角拉成直线。在颈外动脉接近颈总动脉分叉处剪一 小口,将直径