假单胞菌生物合成L半胱氨酸途径中脱巯基酶的研究.pdfVIP

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2015-09-26 发布于重庆
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假单胞菌生物合成L半胱氨酸途径中脱巯基酶的研究

2006年33(4) 微生物学通报 ·21· 假单胞菌生物合成L．半胱氨酸途径中脱巯基酶的研究。余养盛李洋金永杰白钢一杨文博 (南开大学生命科学学院天津300071) 摘要：通过PcR方法扩增得到假单胞菌TSll38L一半胱氨酸脱巯基酶基因(cd)，将其克隆至pBluescriptSKII载体，测定了含有L一半胱氨酸脱巯基酶基因的1．2kbDNA片段序列，并与其它菌株的脱巯基酶基因进行了同源性比较；同时，将其克隆至表达载体pET_2la (+)，I胛G诱导表达，表达产物经Ni—NTA柱亲合层析后，得到纯化的重组蛋白。利用脱巯基酶的活性染色方法对重组表达的L．半胱氨酸脱巯基酶进行了鉴定，并探讨了L一半胱氨酸脱巯基酶的酶学性质，以及在生物转化合成L-半胱氨酸途径中的关键作用。关键词：L一半胱氨酸脱巯基酶，假单胞菌，基因克隆，基因表达，酶学性质中图分类号：Q93 文献标识码：A Res昀rchof IIlVolVedin DesulmydraseL-cysteineBiosynthetic in Pathwayn棚咖mo嬲sp．‘ YU U JIN BAI Yang-ShengYang Yong-JieGang’+YANGⅥren—Bo (co啦鲈旷工泥sc如，Ⅲ，№加i‰妇M妙，兀。彬n300071) the A的晒ct：ne PCR，and L—cysteinedesulnlydr髂egene(甜)of风e以。脚螂sp．Tsll38was蛳pli6edby w髂Iecombinedint11e vector SⅪI．The1．2kbDNA gene fragmentcontaining甜帅pImed c10ning pBIuescript witho山er was cdwasdonedimo也e w鹅sequenced，and诋hamologydesumlydrasesblast；then山e expression 1wGinducement．The was Ni- vecto‘pET-21a(+)，and撕eⅢardexpressedby expre8sionpToteinpuri壬iedby 0f of NTAHis-BindResin．nenthe wagidentmedthemetllod expressionprotein by activitystainingdesulnly- tlle 0f the roleit inthe dmse，aIldch8ract耐zation cdtical biosyll。 L—cysteinedesuⅡhydrase髓d played L—cysteine t王letic werediscussed． pathway