利用内标为基础的RTPCR技术检测葡萄茎痘伴随病毒.pdfVIP

园艺学报2006，33(5)：1083～1086 ActaHorticuhuraeSinica 利用内标为基础的RT—PCR技术检测葡萄茎痘伴 随病毒 牛建新1’2 李西平1 赵 英1 张 强1 马兵钢1’2 (1石河子大学农学院园艺系，新疆石河子832003；2新疆兵团绿洲生态农业重点实验室，新疆石河子832003) 摘要：选取经RT-PCR检测确认带葡萄茎痘伴随病毒的‘全球红’葡萄品种。以葡萄叶片、韧皮部 作为试材，采用SDS法提取高质量总RNA作为模板，以GRSPaV的特异互补引物引导，反转录合成cDNA， 通过PCR扩增，获得830 bp的预期目的片段。以线粒体had5基因为内标，建立了GRSPaV与had5共扩增 体系，将扩增的GRSPaV特异性片段及had5目的片段分别克隆测序，与NCBI中所提交的核酸序列进行比 关键词：葡萄茎痘伴随病毒；RT—PCR；nad5；检测 436 中圈分类号：S663．1；S 文献标识码：A 文章编号：0513-353X(2006)05-1083-04 RT-PCRtoDetect stem associated Using Assay Grapevinerupestrispitting virus on BasedInternalControl Niu Ma Jianxinl7，Li Xipin91，ZhaoYin91，ZhangQian91，andBinggan91，2 (1Departmentof Horticulture，AgriculturalCollege，ShiheziUniversity，Shihezi，Xinjiang832003，China；2KeyLaboratoryof Oasis EcologyAgricultureofXinjiangBingtuan，Shihezi，Xinjiang832003，China) to a for Abstract：This establish and detection studyprefer rapid，sensitive。accrualpractical system stem associated oninternalcontr01．Thesevarieties Grapevinerupestrispitting virus(GRSPaV)based grapevine suchas‘Red Golbe’thatweredetectedto GRSPaVRT．PCRwereselectedas material．U— carry by testing SDSmethodtoextract totalRNAfrom leavesand was to sing highquality grape phloem，whichtemplatesyn— thesizetheeDNAthe ofGRSPaVantisense PCR by guide special primer．Afterthat，throughamplification， the830 was ofGRSPaVand mitochondrialnad5 bpspecialfragmentgained．TheCO．amplificationsystem plant a