嗜热毛壳菌纤维素酶(CBHⅡ)cDNA的克隆及在毕赤酵母中的表达.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’( )! *’ )# 年 月 !$$% !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 *’+,-.,/ !$$% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 嗜热毛壳菌纤维素酶（ ） 的克隆及在毕赤酵母中的表达 !# ! $%’ （ ） !()*+*, -*. /012344+*, )5 !3((6(-43 73*3 !# 8 52)9 :;329)1;+(+$ 6*,+ $#%’()*+) ’#,)(- #*.+) !:8 刘守安，李多川 ，俄世瑾，张燕 ， ， QRS D’5M7C QR J5’MB5AC O D2M42C AC3 TI7*U VAC 山东农业大学环境生物系，泰安 !F$L ， ， ’ ， 3%4+*/5%$/ (- 6$7#*($5%$/+, .#(,(12 8+$9($1 :1*#0),/)*% ;$#7%*#/2 +# +$ !F$L !#$+ 摘 要 嗜热毛壳菌 !+%/(5#)5 /%*5(4#,)5 B=! 是一种土壤腐生菌，可产生具有重要工业生产价值的纤维素酶类。07BOM 获得嗜热毛壳菌纤维二糖水解酶 （ ）的编码基因（ ）。 序列分析表明 的开放阅读框由 个碱基组 GB0 ! BWI ! 0=! J*7 0=! K!L 成，编码 个氨基酸。推断的氨基酸序列包含一个典型真菌纤维素酶的糖结合域（ ）、催化域（ ）以及二者之间富含脯 KF# BWJ BJ 氨酸和羟基氨基酸的连接桥。根据氨基酸序列推算该酶分子量为%@J，属于糖苷水解酶第六家族，具有该家族催化保守区的 典型特征。GB0 扩增1.! 的成熟蛋白编码基因，利用基因重组的方法构建可在毕赤酵母分泌表达系统中表达纤维二糖水解 酶蛋白的重组表达载体，并转化毕赤酵母得到重组子。在毕赤酵母醇氧化酶:? 基因启动子的作用下，重组蛋白得到高效 表达，小规模发酵量达 。经硫酸铵沉淀、 阴离子层析等步骤纯化了该重组表达蛋白。 X! -:Y-Q JO7OMD,8A/’;, EA;9 H(’? DJDM G7UO 得到重组蛋白分子量为#F@J，与从嗜热毛壳菌中纯化的该酶分子量一致。该重组纤维二糖水解酶作用的最适合温度 %$Z ，最适8IK X$，在F$Z 的半衰期为$-2C，具有较好的热稳定性。 关键词 嗜热毛壳菌，纤维二糖水解酶， 克隆