基于滤纸微孔板的酶联免疫吸附测定方法研究.pdfVIP

第41卷 分析化学(FENxIHUAxuE)研究报告 第1期 2013年1月 ChineseJo哪alofAnal”icalChemis缸_y 20～24 基于滤纸微孔板的酶联免疫吸附测定方法研究 白鹏 罗雁 李英 余晓冬+ 陈洪渊 (南京大学化学化工学院，生命分析化学国家重点实验室，南京210093) 摘要用光刻法在普通定量滤纸上制作出了疏水图案，得到了滤纸微孑L板。将表面修饰后的Si0：微球负 载在滤纸表面，以提高滤纸纤维吸附蛋白质的能力，基于此建立了以间接酶联免疫吸附法测定羊抗兔免疫球 蛋白的方法。以酶标兔抗羊IgG为例，负载si0：微球后，滤纸微孑L板吸附该蛋白质的量提高了20％～700％； 将si0，负载法应用于羊抗兔IgG的检测时，可使信号增强20％一150％。在本实验条件下，测定羊抗兔IgG 的线性范围为3×10。2～3×lo书mmoI／孑L。本方法使生物免疫试剂消耗量减少至3—5“L／孑L、检测时间降至 20min／板、滤纸微孑L板制作成本可低至约每板1．1美元，为研制准确、快速和低成本的疾病检测设备提供了新 的思路和可能性。 关键词滤纸；微孑L板；光刻；酶联免疫分析；二氧化硅微球 1 引 言 近年来，随着微流控芯片技术的迅速发展，纸作为一种廉价易得的材料进人了科研工作者的视线。 纸轻薄、可燃、易加工，表面能修饰多种功能基团或共价结合蛋白质、DNA和一些小分子，其强吸水性使 得设备不需要额外的动力系统【1]。基于纸的诸多优点，研究人员通过多种加工方法将其作为基材，引入 了微流控分析设备，以期实现快速、实时并且价格低廉的疾病诊断，从而为广大的发展中国家和地区提 供更为经济的疾病监控方法引。 制作纸基检测装置的第一步是在纸上制造出疏水的隔离带，从而让亲水部分(即纸)形成所需的通 道、网络或其它形状。Dongchai等吲用丝网印刷技术将固体蜡涂在滤纸表面，加热后蜡渗入滤纸即可形 制”在滤纸上，获得疏水壁垒。Li等引成功地将具有纤维素反应活性的疏水化试剂以喷墨打印的方式印 制在纸上，利用这种办法还可以将生物分子或指示试剂输送到纸上的特定位置。Abe等川用喷墨蚀刻 法除去了纸上的聚苯乙烯涂层，得到亲水性通道；与之类似的还有用等离子氧化的方法来去除疏水涂 层【111。然而，由于涂层或“墨水”通常只能被涂覆在纸的表面，上述印刷类方法很难获得贯穿整层纸张 横截面、宽度均一的图案，因此限制了纸基芯片的二维及三维结构应用。为克服此不足之处，whiteside 课题组采取以光刻胶浸润滤纸后紫外线光刻的方法获得了精度高、宽度均一的图案化滤纸板口21，并对此 方法展开了一系列的研究和改进E”叫引，其中一项重要的工作就是制备了与传统96乃84微孔板相同规 格的纸基微孔板口91，并成功用于定量检测人体血清中的抗HIV一1gp41【20]。目前的报道中纸基芯片已成 功应用于检测葡萄糖、乳糖、尿酸、胆固醇、乙醇和抗坏血酸等多种小分子【5，理l】以及血清中的抗原抗体。 对于纸 与传统的聚苯乙烯微孔板相比，纸基微孑L板具有以下显著优点：(1)样品及试剂用量很少 基微孑L板，每次3～5¨L／孑L的试剂用量即可完成检测，约为传统微孑L板的1／10；(2)检测快速使用传 统微孔板时的孵育和封闭时间约为1h，整个检测通常需要3h或更多；而在纸基微孔板上完成一次间 接ELIsA检测的时间不超过25min；(3)成本低条件优化后，每张96孑L纸基微孑L板的材料成本可低 至每板0．03美元(实验室水平)印]，昂贵的生物试剂的用量大幅度降低，极大地削减了使用成本。此外， 传统微孔板需要使用价格酶标仪检测信号，而纸基微孑L板用非常便宜的台式扫描仪即可获取信号；(4) 图案设计简单有利于与现有的工具及设备兼容集成。尽管纸基微孑L板的检测限和灵敏度低于传统方 2012-04_20收稿；2012．07-23接受 究群体项目(N021121091)资助 + E—mail：”xd@nju．edu．cn 万方数据 第l期