基于聚酰胺胺的非病毒载体携带Mathl基因进行体外基因转导的有效性和安全性评价.pdfVIP

· 258 · ChineseJournalofOtologyVo1．9，No．3，2011 蒜赫藏藏鸯嘲彩潲 基于聚酰胺胺的非病毒载体携带Mathl基因进行体 外基因转导的有效性和安全性评价 吴南 陈志婷 -，3 李敏 刘会 占 任丽丽 吴雁 杨伟炎 杨仕明 1 解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科医院 解放军耳鼻咽喉研究所 (北京 100853) 2 国家纳米科学中心 (北京 100190) 3 兰州大学第一医院耳鼻咽喉头颈外科 (兰州 730001) 【摘要】目的 研发一种可用于携带 Mathl基因进行基因转导的基于聚酰胺胺树枝状聚合物 (PAMAMDen— drimers．PAMAM)的非病毒载体，对其转导效率和安全性进行评价，为进一步在体基因治疗奠定必要的实验基础 和理论依据 。方法 PAMAM (7代)通过加热活化和环糊精 (Cyclodextrin，CD)表面修饰后 ，与 pRK5一MathI-EGFP 质粒在不 同氮磷 比(N／P)的情况下，浮配形成基 因一载体复合物 ，在无血清培养条件下 ，对 HEK一293T细胞系进行 体外基因转导，对其转导效率和安全性进行评价。加热活化温度设定为 6O℃，时间分别为 ：0、6、12、24、48小 时：聚酰胺胺树枝状聚合物／环糊精质量 比(PAMAM／CD)分别为 ：(1／2，1／1，4／1，8／1和无 CD)；N／P分别为 ：l／ 1．2／1．5／1和 10／1。通过荧光倒置显微镜观察 EGFP阳性细胞并计算百分 比的方法评价基因转导有效率 ，通过怀 准 MTF实验评价其安全性 。结果 通过 60℃加热活化 24小时、质量 比为 1／1进行环糊精表面修饰后获得 的基于 PAMAM 的非病毒基因载体 ，携带 pRK5一Math1一EGFP质粒进行基因转导的效率最高，达到 38．14±2．85％，同时其 细胞存活率达到 68．86±3．44％。结论 我们获得 了一种基于 PAMAM 的非病毒基凶载体 ，可高效、安全地携带 Math1进行基因转导，为其下一步进行在体基 因转导研究奠定了必要 的实验基础 ，有望未来应用于临床 的聋病基 因治疗。 【关键词】 基因转导； 聚酰胺胺树枝状聚合物 ； Mathl； 活化 ； 环糊精修饰 【中图分类号】R349．83 【文献标识码】A 【文章编号】 1672—2922(2011)03—258—06 EfficiencyandsafetyofM athlgeneinvitrotransductionwithaPAMAM dentrimers-basednon-viralvector WUNan|，CHEN Zhi—ting~一，L1M in2,LIUHui-zhan|REN Li—li，WU Yah2,YANG Wei—yahf，YANG Shi—mingi ， 1 DepartmentofOtolaryngologyHendnadNeckSurgery,Institute Otolaryngoloyg, ChinesePLAGeneralHospitalBeijing100853，China 2 NationalCenterforNnaoscienceandTechnologyBering100190,China 3 DepartmentofOtolaryngoloyg HeadandNeckSurgery,1stHospitalofLanzhouUniversity， Lanzhou 0001．China