人血浆前白蛋白的分离和纯化(论文资料).pdfVIP

维普资讯 二≮ j 专恕 ，0 一 2二 J 悔 第 一 科 人 学 报 l驰 ＼eta Univrs1ta‘ MkuiicinMisSecondae Shanghai 人血浆前 白蛋 白的分离和纯化 ≥ 上海第二医科大学实验桉 医学教研室 (200025) 墼—垦料 戴腾昌 夏宗勤 ^ 摘 要 1建立 一 种新的分离纯化』、血浆前门蛋白(PA)的 法 由酚试剂沉淀后的血浆，通过 离子交换树脂分 离所得PA．用高效液相色潜仪 (HPLC)进行纯化．经SDS一聚丙烯酰胺凝胶 电淋 测定，其分子量在55000左右．纯度达到电泳纯和免疫绝。此法步骤简单．用血量少 ．适用 于实验室 常规操作和临床人体研究 关键词 前 白蛋 白： 分离纯化： 高效液柑色谱仪 前 白蛋 白(prealbumin，PA)是 由肝细胞 3．仪器 ECONO低压层析系统 (BIO— 合成的一种血浆蛋 白质，具有重要的生物活 RAD)，高效液相 色谱仪 (BIO—RAD)，垂直 性。在血浆中PA与甲状腺素结合，参与血液 电泳仪(BIO—RAD)。 中甲状腺激素的转运 ，也能 与视黄醇和视黄 方法 醇结合蛋 白三者缔合成复合物 参与维生素 1、阴离予交换树脂分离PA 10m1人血 A的转运和代谢 …。在进行维生素A 和 甲状 浆中溶解2g NaC1，加人5．5％(V／V)酚的水 腺素代谢、蛋 白质营养不 良和肝脏毒性等方 溶液 ，混匀 ，离心 (12000r／min×15min)。上 面研究时，都需要用纯化的PA 但 往所报 清液过滤后 置4℃冰箱用蒸馏水透析48h 道的分 离纯化方法，大 多需要较大量的血 换缓冲液A(0、05mol／L Tris，pH 7_5)继续 浆，步骤繁琐 操作复杂，难 以用于实验室常 透析。待 E低压层析分 离采用DEAE—Se- 规操作和临床研究。我们参 照有关方法，用 phacel层析柱0．5cm ×6cm，依次用缓冲液 阴离子交换树脂对PA进行粗分后 。，首次运 A 缓冲液B(0、05mol／L Tris，含0．1mol／L 用高效液相色谱仪纯化PA 建立了 ’种适用 NaC1，pH7．5)缓冲液c(o．05mol／LTris，含 于临床研究的分离纯化人血浆PA的方法。 0．15mol／L NaC1，pH7．5)，缓冲液D(0．05 mol／LTris．含0．4otol／LNaC1．pH7．5诺 材料与方法 脱 洗脱速度0．5ml／min，用280nm波长紫外 检测仪 自动记录 ，收集各蛋 白组分。 材料 2．高效液相色谱仪 (HPLC)纯化 色谱 1．血浆 取 自正常献血者。 柱：Bi0 戥lTsk 400 f300×7．5mm)；流动 2．试剂 DEAE Sephacel (Pharma． 相 ：0．02mol／L NaH PO ，0．05mol／L cia)．抗PA血清 (上海生物制 品研究所)低分