从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒(论文资料).pdfVIP

中国试剂网 3.19.2.3 从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒 材料： 缓冲液和溶液： 氯仿 NaCl （固体） 聚乙二醇（PEG 8000 ） SM 酶和缓冲液： 胰Dnase I (1mg/ml) 胰Dnase I (1mg/ml)于TE 中（ph7.6 ） 离心机和转子： Sorvall GSA 转子或相当型号 专用设备： 量筒（2L ） 载体和菌株： 大肠杆菌培养物，经λ噬菌体感染和裂解 方法： 用PEG 沉淀噬菌体颗粒 1、 将含有λ噬菌体的裂解培养物冷却至室温，加胰Dnase I 和Dnase 至终浓度 约为1ug/ml，室温温育30min 。 2 、 每500ml 培养物加入29.2 固体NaCl （终浓度为1mon/L），搅拌使其溶解。 将培养物冰浴 1h。 3、 4 ℃，11000g （8300r/min 于Sorvall GSA 转子中）离心10min 以去除细胞碎 片，将四份培养物的上清混合置于2L 的干净量筒中。 4 、 测定所收集上清的总体积，然后转移至2L 的烧瓶中，加固体PEG 至终浓 度为10% （m/V ，加500ml 上清加50gPEG ），于室温用磁力搅拌器慢慢搅拌溶解 PEG 。 5、 将噬菌体/PEG 溶液转移至聚丙烯离心管中，于冰水浴冷却，至少放置 1h 以便使噬菌体颗粒发生沉淀。 中国试剂网 3.19.2.3 6、 4 ℃，11000g （8300r/min 于Sorvall GSA 转子中）离心10min 以回收沉淀的 噬菌体，去上清，将离心管倒过来倾斜放置 5min，以便是剩余液体充分流干。 用移液器吸取残余的液体。 用氯仿抽提细菌碎片： 7、 用一带橡皮球的宽口吸干将噬菌体沉淀轻轻地重悬于 SM 中（针对步骤 3 每500ml 上清加8ml SM ），将离心管倾斜放置，使SM 完全覆盖并浸泡噬菌体沉 淀，室温放置1h。 通过加入等体积的氯仿抽提噬菌体悬浮液中的PEG 和细胞碎片，温和振荡30s 。 4 ℃，3000g （4300r/min 于Sorvall GSA 转子中）离心 15min 以分离有机相和亲 水相，回收含噬菌体颗粒的亲水相。