ECO板碳源与实验方法.docVIP

EcoPlateTM 各区井中的碳源 A1空白 Water 水 A2多碳糖 ?-Methyl-D-Glucoside ?-甲基D-葡萄糖苷 A3有机酸 D-Galactonic Acid y-Lactone D-半乳糖内酯 A4氨基酸 L-Arginine L-精氨酸 B1有机酸 Pyruvic Acid Methyl Ester 丙酮酸甲脂 B2多碳糖 D-Xylose D-木糖 B3有机酸 D-Galacturonic Acid D-半乳糖醛酸 B4氨基酸 L-Asparagine L-天冬酰胺酸 C1聚合物 Tween 40 吐温40 C2其他多元醇 I-Erythritol I-赤藻糖醇 C3有机酸 2-Hydroxy Benzoic Acid 2-羟苯甲酸 C4氨基酸 L-Phenylalanine L-苯基丙氨酸 D1聚合物 Tween 80 吐温80 D2其他多元醇 D-Mannitol D-甘露醇 D3有机酸 4-Hydroxy Benzoic Acid 4-羟基苯甲酸 D4氨基酸 L-Serine L-丝氨酸 E1聚合物 a-Cyclodextrin a-环式糊精 E2胺 N-Acetyl-D-Glucosamine N-乙酰基-D-葡萄胺 E3有机酸 y-Hydroxybutyric Acid y-羟基丁酸 E4氨基酸 L-Threonine L-苏氨酸 F1多碳糖 Glycogen 肝糖 F2胺酸 D-Glucosaminic Acid D-葡萄胺酸 F3有机酸 Itaconic Acid 衣康酸 F4氨基酸 Glycyl-L-Glutamic Acid 甘氨酰-L-谷氨酸 G1多碳糖 D-Cellobiose D-纤维二糖 G2其他 Glucose-1-Phosphate 葡萄糖-1-磷酸盐 G3有机酸 a-Ketobutyric Acid a-丁酮酸 G4胺 Phenylethyl-amine 苯乙基胺 H1多碳糖 a-D-Lactose a-D-乳糖 H2多元醇 D,L-a-Glycerol D,L-a-甘油 H3有机酸 D-Malic Acid D-苹果酸 H4胺 Putrescine 腐胺 微生物群落多样性指数的公式 多样性指数 用途 公式 备注 Shannon指数 评估丰富度和均度 H′=-∑pilnpi） Pi为第i孔的相对吸光值（C-R）与整个平板相对吸光值总和的比率 Shannon均匀度 通过Shannon指数计算出的均度 E= H′/lnS S为颜色变化的孔的数目 Simpson指数 评估某些最常见种的优势度指数 ni是第i孔的相对吸光值（C-R）； N是相对吸光值总和；Simpson指数用1/D表示 McIntosh指数 基于群落物种多维空间上的Euclidian距离的多样性指数 同上 McIntosh均匀度 由McIntosh指数计算得出的均匀度 同上 统计　　采用ＳＡＳ/ｐｃ统计分析系统(6.04版本)中的Ｐｒｏｃｃｌｕｓｔｅｒ,ＰｒｏｃＰｒｉｎｃｏｍｐ(ｆａｃｔｏｒ)程序分别进行聚类、主成份(因子)分析;并采用Ｂｉｏｌｏｇ系统的Ｍｌｃｌｕｓｔ程序进行聚类分析. BIOLOG GN微平板 BIOLOG GN微平板是一种多底物的96孔ELISA反应平板。除对照孔A1只装有四氮叠茂和一些营养物质外，其余95孔作为反应孔还装有不同的单一碳底物。在进行ELISA反应时，各孔中的微生物利用碳底物，呼吸作用产生NADH，引起四氮叠茂发生氧化还原变色反应用于检测(BIOLOG Inc,1993)。微生物对不同碳底物的利用情况可用反应孔中的颜色变化来表示。通过对孔中颜色变化的光吸收值的测量，可获得较准确的信息。 操作步骤 参照Garland Mills（1991）和杨永华等（2000）的方法，利用BIOLOG GN 微平板来研究不同微生物群落对不同单一碳源利用能力（Sole-Carbon-Sourse Utilization,SCSU）的差异，以获得堆肥微生物群落结构和功能多样性方面的信息。具体步骤如下： a. 加250mL 0.1mol/L磷酸缓冲液（K2HPO4/KH2PO4,pH7.0）于三角瓶中，灭菌;0.85%的NaCl生理盐溶液，灭菌。 b. 称相当于25g烘干重的新鲜堆肥，加入三角瓶中，封口（1：10提取液; c. 摇床振荡1min后，冰浴1min，如此重复3次; d. 静置2min，取上清液3mL于已灭菌的50mL的三角瓶中，加入27mL无菌0.1moL/L磷酸缓冲液，稍加振荡（1：100提取液）; e. 重复步骤d, 直至稀释到每毫升稀释液大约3×104～4×104 个微生物; f. 将BIOLOG GN 微平