邻硝基苯磺酰氯柱前衍生氨基酸分析方法研究.pdf

3 摘 要 氨基酸是蛋白质的基本单元，是人体完成生理功能的必需物质。发展操作简 便、普适性广、重复性优良的HPLC分析方法，一直是分析化学领域探索的重要 课题。 ． 实验采用邻硝基苯磺酰氯作为标记试剂，RP．HPLC为分析模式，建立了一 种新的氨基酸分析方法。通过液质联用对产物进行定性，推测衍生试剂与一、二 级氨基酸的反应机理。实验考察了衍生温度、衍生时间、缓冲液pH值以及氨基 酸和衍生剂的摩尔比这四个因素对衍生反应的影响。最终确定了衍生反应条件： 以pH9．O的硼砂一硼酸缓冲液为氨基酸缓冲液，氨基酸与衍生试剂的摩尔比为 l：6，25℃水浴中反应10min。 实验以RP一胛LC为分析模式，选择乙腈一NH4C缓冲液体系作为液相分离 氨基酸衍生物的流动相。考察了NH4AC缓冲液浓度、pH值、柱温、流速、洗 脱条件等因素对氨基酸分离分析结果的影响。建立了20种氨基酸的HPLC分离 方法：心om鹊il 检测波长：UV mmol·L-1浓度范围内，氨基酸峰面积与浓度呈良好的线性关系，相关系数为 该衍生方法和分析系统重现性良好，即使在室温下保存，衍生产物都具有良好的 稳定性。 基于发展的新方法，对几种实际体系中的氨基酸含量进行了测定。包括玉米 浆中游离氨基酸的测定，Y-D一谷氨酰一L一色氨酸合成体系的分析方法的建立，绿 豆蛋白酶解液中氨基酸含量的测定，实验还对进口蛋白胨和国产蛋白胨中氨基酸 的含量进行了比较，结果令人满意。 实验结果表明，邻硝基苯磺酰氯柱前衍生氨基酸分析方法具有衍生反应温 和、快速，操作简便的优点，而且HPLC分析条件简单、对仪器要求较低、重现 性好。此方法能用于食品、反应液等体系中氨基酸含量的测定，是一种操作简便、 普适性广、重复性优良的HPLC分析方法。 关键词：邻硝基苯磺酰氯衍生化氨基酸肝LC n ABSTRACT Amino w弱ttlebasicunitof ofthe acid，which proteins，w觞oneimportant to had beenan tllemeinthe hum锄being．Thus，italways compounds imponant 仔ontier HPLC methodfor of觚al”icalchemist哕t0deVelopwidely-suitedanalysis aminoacidswim aIld sep删ionreproducibili够 900d forme A methoddetemlinationofamilloacidsh硒been noVel锄alysis deVeloped of chloride．TheconditionsofderiVatizationwere byuse D-Nitrobenzenesulfonyl studiedt0f．mdan includedthereaction optimalprocedure，which time，他action Value．Theflllalconditionswere reaction tem