慢性胃食管反流病动物模型制备和HO-1在食管和肺组织中表达及作用机制研究.pdf

中文摘要 慢性胃食管反流病动物模型制备与H0—1在食管和肺 组织中的表达及作用机制研究 摘 要 目的：首先探讨保留全胃的3种不同类型胃食管反流大鼠模型的制 备方法，旨在为研究胃酸、十二指肠液(主要为胆汁)及混合反流的作用 机制及治疗提供较理想的慢性反流动物模型。在成功制备动物模型基础上 进一步观察大鼠肺部的组织学改变并研究血红素加氧酶一1(HO一1)、NOS2 在食管及肺部组织中的表达，再通过分组予以H0—1抑制剂和诱导剂干预， 以探讨H0—1在GERD发生发展机制中的作用。 方法：首先选择123只成年、sD雄性大鼠进行实验。造模时体重230 组、十二指肠液反流为主(DER)模型组和十二指肠胃食管反流(DGER) 模型组。SO组20只在常规开腹后游离食管下段和十二指肠，15分钟后关 腹。GER模型组先采用幽门部分缝扎+贲门肌切开术制备模型9只(GERl)， 因术后1周内死亡8只而放弃。后改行食管胃底吻合术制各模型20只 (DERl)，亦因术后动物短期死亡而改为食管十二指肠(胆管开口远侧) (EGDA)制备胃十二指肠液混合反流47只。术后存活动物给与颗粒饲料 喂养，每周测量体重，观察营养状态。于术后喂养1个月、2个月、3个 月、4个月各组分批(每次3～5只／组)经股静脉放血处死并观察食管局 部大体形态变化，随之取动物食管和肺组织标本，部分以10％中性甲醛固 定，制各组织切片，HE染色光镜下观察病理组织学改变，免疫组化检测 western 非预期死亡37只大鼠随即进行尸体解剖，以分析其死因。剩余DGER组 及生理盐水对照组，隔日分别给予腹腔注射Hemin、ZnPP及生理盐水，另 选S0组动物作为空白对照。于干预处理第10次后次日处死动物取材，所 取组织标本处理同上。统计学分析各组动物体重变化(术后4周内)、死 中文摘要 达情况等。 结果：①术前各试验组平均体重与对照组相比无显著性差异 (乃0．01)，术后1周各组动物体重均有增加，但各试验组动物体重增加 仍低于对照组(尺O．05)，术后2周至4周各组大鼠饮食、活动基本恢复正 组大鼠平均体重增加仍显著低于对照组(尺O．01)。②除术前麻醉意外死 sO组大鼠20只未见死亡。通过尸解所见表明死因有胃扩张、出血、胃穿 孔、窒息、胸腔感染、腹腔感染等。③食管黏膜大体形态变化：1个月时 除GER2和DGER组各1只外，余模型大鼠均可见不同程度黏膜病变，表现 为充血、散在点线状红斑及糜烂溃疡。2个月各组模型均可见较明显的食 管黏膜病变，且随时间延长各组食管黏膜改变逐渐加重，尤以D职组为著， 食管下段糜烂、溃疡扩大并融合，并出现灰白色黏膜高度增生外观(白斑)， 范围逐渐向上延伸，食管壁增厚，管腔不规则扩张。以食管损伤程度相比： 时间段sO组动物食管黏膜外观基本正常。④食管黏膜组织学改变：术后 1个月时各试验组动物均已发生不同程度的组织学改变，其中GER2组以 轻中度炎症为主，DER2组、DGER组均为中重度炎症；2个月、3个月及4 ，：一月时各组均为中重度炎症，且以淋巴细胞及少量嗜酸性粒细胞和巨噬细 胞浸润的慢性炎症为主，某些动物尚伴有急性炎细胞浸润。食管上皮部分 或全层缺损，底部覆以渗出物及肉芽组织，并可见食管上皮层不同程度增 厚，以基底层及棘层细胞增生为主，乳头延长，角化过度，尤以DER2组 为著。各组各时间段食管黏膜均未见柱状上皮化生(Barrett食管)。各组 组织学改变随术后时间的延长而加重，由下向上逐渐减轻。对照组均未见 明显组织学改变。⑤肺组织病理学改变：光镜下观察可见模型组大鼠肺组 织不同程度炎性改变，表现为支气管黏膜、肺泡壁充血水肿，炎细胞浸润， 中文摘要 假手术组及干预试验中的空白对照组无明显光镜下异常表现。⑥食管及肺 蛋白及免疫组化阳性细胞于术后1个月时表达均高于假手术组，其中GER 组DGER组DER组，随术后时间延长其表达呈降低趋势：干预试验中， 及免疫组化阳性细胞表达趋势与食管组织一致。⑦食管及肺组织中NOs2 表达：免疫组化染色、western 较各模型组食管组织中NOS2表达增强，其中以DER组为著，DGER组次之， GER组最低，随术后时间延长而逐渐增强。在干预试验中，与对照组相比， 的表达与食管组织中一致。⑨HO一1、NOS2