RNA干扰YAP基因对人膀胱癌T24细胞株增殖和迁移能力的影响.pdfVIP

中国癌症杂志 2014年第24卷第6期 《 》 406 CHINA ONCOLOGY 2014 Vol.24 No.6 RNA干扰YAP基因对人膀胱癌T24 细胞株增殖和迁移能力的影响 胡光辉　徐亮　赖鹏　郭锥锋　刘欢　刘敏　王云　姚旭东　许云飞 上海市第十人 民医院泌尿外科 ，同济大学附属第十人 民医院 ，上海 200072 　　［摘要］　背景与目的：膀胱尿路上皮癌是泌尿统系最常见的肿瘤，术后易复发及转移，Yes相关蛋白 (Yes associated protein，YAP)基因与膀胱癌关系密切，本研究探讨通过RNA干扰技术沉默膀胱癌T24细胞中 YAP基因的表达，观察YAP基因沉默后对人膀胱癌T24细胞增殖、迁移能力的影响。方法：用阳离子脂质体转染 试剂LipofectamineTM2000将靶向沉默YAP基因的小干扰RNA (small interfering RNA，siRNA)序列转染至膀胱 癌T24细胞株中，采用实时定量逆转录聚合酶链反应 (quantitative real time-polymerase chain reaction， qRT-PCR)、蛋白质印迹法 (Western blot)检测转染后T24细胞中YAP基因及蛋白的表达水平，细胞增殖活性检 测试剂盒 (cell counting kit-8，CCK-8)、Transwell迁移试验以及划痕实验观察siRNA在体外对人膀胱癌T24 细胞增殖、迁移能力的影响。结果：转染siRNA后，YAP RNA和蛋白表达量同空白对照以及阴性对照组相比被显 F P F P 著抑制 (RNA： 93.91， ＜0.000 1；蛋白： 4.62， ＜0.05)，CCK-8增殖活性实验结果显示，RNAi干扰YAP F P F P 表达可以显著抑制膀胱癌T24细胞的增殖活性 (12 h： 6.00， 0.037；24 h： 41.72， 0.000 3；36 h： F P F P F P 462.8， ＜0.000 1；48 h： 236.6， ＜0.000 1；72 h： 140.5， ＜0.000 1)，通过Transwell实验和划 F P 痕试验发现，RNAi干扰YAP表达显著抑制膀胱癌T24细胞的迁移能力 (Transwell： 43.55， ＜0.05；划痕： F P YAP 43.55， ＜0.05)。结论： 基因是膀胱肿瘤增殖及迁移的重要调控因子。 　　［关键词］　膀胱癌；Yes相关蛋白；RNA干扰技术；细胞增殖；细胞迁移 　　DOI: 10.3969/j.issn.1007-3969.2014.06.002 　　中图分类号：R737.14　　文献标志码：A　　文章编号：1007-3639(2014)06-0406-06 Inhibition of YAP gene