实时定量PCR的操作流程.pdfVIP

116 生命科学趋势 生命科学论坛精华专题 - - 2003 年 12 月 第 1 卷 第 4 期 Trends in Life Sciences 用于检测细胞基因转录水平的实时定量 PCR 的操作流程 （Real Time Quantitative PCR Protocol For Detection of Gene Expression ） 第一部分 原理 real time PCR 是普通 PCR 的一项改进，使用了针对扩增DNA 的荧光物质，使得DNA 的数量与检测到的荧光强度成线性关系，大致得到DNA 的扩增曲线（如，图一）。 图一：引自美国应用生物系统中国公司网站——实时荧光定量 PCR ——一种科学准确 的定量方法。 名词解释： Rn:一个反应管经 n 次热循环后，测得的荧光强度。 Rn+:反应管含有模板 DNA 。 Rn-:反应管含有模板 DNA 。 无模板对照：No template control ，Rn- ，理想情况下，是一条平线，只具有背景荧光数值。 Threshold: 荧光（Rn ）超过本底时的临界数值。 Ct: threshold cycle，临界循环数，threshold 横线与扩增曲线相交，所得交点所对应的循环数。 基线：bas