日本血吸虫肌醇单磷酸酶SjIM的克隆、表达及动物免疫的保护效果评估.pdf

论文题目：日本血吸虫肌醇但磷酸酶SjlM的克隆、表达及动物免疫保护效果评估 ．学科专业吗：动物学 学位申请人：吕立婷 指导老师：林矫矫研究员 摘要 血吸虫病(Schistosomiasis japonicum)感染引起的人畜共患的寄生虫病。在我国流行的是日本血吸虫病。近年来， 我国血吸虫病防治工作己取得了举世瞩目的成就，但单靠药物不能控制血吸虫病的流 行，且长期反复的药物治疗会引起血吸虫产生抗药性的危险，因此加强血吸虫病疫苗 的研制开发及疫苗候选分子的筛选无疑是血吸虫病防治的重要手段。肌醇单磷酸酶 (Inositol 生虫中IM基因的功能鲜有报道，探讨sj蹦的生物学功能可为血吸虫疫苗候选分子的 筛选提供了新思路。本研究利用生物信息学和分子生物学技术首次对日本血吸虫肌醇 单磷酸酶的基因进行了克隆、表达、并对SjIM重组蛋白诱导的免疫保护效果进行了 初步评估。 一．日本血吸虫SjIM基因的克隆及在不同发育阶段虫体中mRNA的表达分析。 通过BLAST分析比对，获得Sj蹦基因的全长eDNA序列，该基因核苷酸序列与日 本血吸虫其他已知基因无显著同源性，为日本血吸虫的新基因，命名为SjIM。GenBank 中均有表达，其中在35d虫体内表达量最高，且雌虫体内表达量高于雄虫。 二．重组表达质粒SjlM．pET-28a的构建、表达及免疫保护效果的评估。 coli(DE3)中以包 成功构建了S{IM．pET-28a重组原核表达质粒，该重组蛋白在E 涵体形式表达，分子质量约为31kD，Westernblotting结果分析表明该融合蛋白具 果可能与免疫小鼠血清中高滴度的IgG特异性抗体有关。 I VAX N 三．真核质粒SjM．P I的构建和DA疫苗的免疫保护效果评估 成功构建了重组真核表达质粒SjlM—pVAXl，用重组真核质粒免疫BALB／c小鼠， 小鼠在3次免疫后诱导产生了高滴度的特异性IgG抗体。推测重组真核质粒 特异性抗体有关。 和真核重组质粒SjIM-pVAXI免疫小鼠，均诱导了部分免疫保护效果。本文研究为深 入探讨SjIM的生物学功能，筛选新的血吸虫病疫苗候选分子提供了基础。 关键词：日本血吸虫；Sjl／Vl；克隆表达；免疫保护；DNA疫苗 II ANDBIOLOGICAL CLONING,EXPRESSION 氏Na、ElI【SISOFGENES1IM0澄sCHlSTosoMAJAPoNlcUM ABSTRACT SchistosomiasisiSaseriousthreatand zoonotiedisease．Inrencent widespread years， maderemarkableachievementsinChina。Howevermedication schistosomiasiscontrolhas alonecannotcontrolthe of enhance andvaccine schistosomiasis，to prevalence screening is theschistosome vaccinecandidatemolecules development，schistosomiasis undoubtedly disease andcontrolof initiatives．In prevention important