不同体系下根霉脂肪酶失活动力学模型研究.pdf

第23卷第1期 分 子 催 化 V01．23．No．1 JOURNALOFMOLECULAR Feb． 2009年2月 CATALYSIS(CHINA) 2009 文章编号：1001-3555(2009)01-0078-05 不同体系下根霉脂肪酶失活动力学模型研究 尹春华1加，谭天伟2，刘江帆1 (1北京科技大学应用科学学院生物技术系，北京100083；2北京化工大学生命科学与技术学院，北京100029) 摘要：对根霉脂肪酶储存稳定性(干燥状态)及在水中，甘油微量水中等不同体系的热失活机理进行了研究，并 求出了动力学参数．结果表明该酶在不同的外部环境中热失活机理并不一致：干燥酶粉符合一级失活模型，酶水 溶液和酶甘油微水溶液却符合两步串联失活机理，而且证实甘油对该脂肪酶的热稳定性有促进作用． 关键字：脂肪酶；动力学；失活． 中图分类号：Q814．4 文献标识码：A 脂肪酶(三脂酰甘油酰基水解酶，EC3．1．1．3) 霉脂肪酶具有1，3一位置专一性，对短链，中链和长 可用于催化酯化，酯水解，酸解，甘油解等许多有 链的脂肪酸都有很好的催化活性，尤其适合于功能 机化学反应中，在食品，化工，医药，造纸，制革， 性甘油酯的合成¨3。15|．本文对实验室自制的根霉 环境保护等工业中具有广阔的应用前景．脂肪酶作 脂肪酶在各种体系下热失活机理进行了研究． 为一种重要的生物催化剂，高效，反应条件温和， 1材料与方法 但也有容易失活的缺点．对脂肪酶失活动力学的研 究对于研究酶的性质，充分发挥酶的催化性能至关 1．1仪器和试剂 重要．‘1—51 根霉菌株(Rhizopussp)，本实验室保藏；聚乙 引起酶的失活因素很多，如温度，pH，化学试 剂等，其中酶的热失活是最重要的一种酶失活形 厂；其它试剂皆为分析纯．Backman冷冻离心机； 式．在过去的几十年中，已有大量有关酶热失活的 SHA—B型水浴恒温振荡器，常州金城教学仪器厂； 研究，提出了许多失活机理．常见的热失活机理动 HYA恒温摇床，中国科学院武汉科学仪器厂； two states)，并Christ 力学模型有一步失活模型(One-step 列失活模型(Paralleldeactivation)，串联失活模型电器公司． series deactivation)，同时失活模型(Sim． (Two．step 1．2酶活的定义和测定方法 ultaneous deactivation)和混合多步连续失活(Mixed 采用橄榄油乳化法测定脂肪酶活力¨6|．水解 simultaneous—series deactivation)∞-9j．酶失活可能是 7．0下每分钟产生 酶活定义：脂肪酶在37℃、pH 与活性有关的一系列相关化学键或“敏感结构域” 1“mol脂肪酸所需的酶量，即为1个脂肪酶活力单 的破坏¨0|，虽然有些失活机理可以普遍使用．但不 位，以U表示． 同的酶有各自自己的敏感中心¨1。．失活形式也各 1．3根霉脂肪酶的发酵生产条件和酶的提取方法 有不同．而且失活行为还与酶的应用形式有关：如 参看文献