MR示综骨髓干细胞靶向大鼠肝癌的实验的研究.pdfVIP

中文摘要 MR示踪大鼠骨髓间充质干细胞靶向肝癌的实验研究 摘 要 第一部分骨髓间充质干细胞的培养、纯化及扩增 目的：本部分建立分离、纯化、培养、鉴定、扩增骨髓间充质干细胞 (BMSCs)的方法。为以后的实验做好准备。 析其基本的生物学特性。分析其形态特征和增殖特点。使用流式细胞仪验 胞、骨细胞分化的潜能。 结果：原代BMSCs呈纺锤样，主要以集落生长为主。传至3代，细胞 结论：我们成功地分离、培养及扩增了大鼠BMSCs，并对其进行了 鉴定，达到了实验目的，为下一步的研究奠定了基础。 第二部分超顺磁性氧化铁微粒标记大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究 目的：探讨不同浓度超微超顺磁性氧化铁微粒(USPIO)与多聚左旋 细胞生长活力的影响，寻找最佳配比浓度。 方法：本实验设立7个研究组。空白对照组的检测管仅含有未标记的 后36h，取标记细胞数1×105个，重悬于0．5ml 管放入一内含琼脂糖凝胶的塑料模型中，采用1．5T M砌扫描。扫描序列包 分析。细胞活力的测定采用台盼蓝排除试验。细胞生长的观察采用MTT 中文摘要 细胞内铁的含量，判断铁含量与MR信号的关系。 结果：镜下观察B．F组标记细胞仍保持干细胞原有形态，胞质内均可见 普鲁士蓝染色颗粒。随标记浓度的增加和PLL的使用，细胞内蓝染颗粒增 多。电镜下观察SPIO．PLL混合物标记后的干细胞其内的铁离子聚集成团， 粒径多在10～20nm之间。而仅有SPIO标记的干细胞其内铁离子数量较少， 分布稀疏，很多铁离子没有集聚呈团。A．F组台盼蓝染色细胞活力分别为 99．20％4-1．1 标记后的BMSCs保持较好的细胞活性。细胞浆内的铁离子对细胞的影响 较小。根据各组细胞的生长曲线判断单纯使用铁离子浓度达至J200pg／ml 时对细胞的生长有抑制作用；使用1．0pg／mlPLL同样会对细胞的生长产生 胞相比有显著差异(PO．05)，标记后培基内铁离子的剩余量有显著差异。 Tl 子的变化情况。 于1．O“∥ml。根据本实验的结果我们认为SPIO使用l00}tg／ml，PLL选取 O．7599／ml标记细胞即对细胞活性和生长无不利影响，且标记细胞的信号 强度较强。 第三部分不同MR扫描序列检测SPIo敏感性的实验研究 目的：比较在两种1．5TMR机不同的扫描序列对于磁标记BMSCs检测 的敏感性。 及GE ESWAN幂HR2*。MR信号值组间比较采用方差分析。 结果：各扫描序列对不同浓度SPIO均有信号强度的差异(P0．05)。 综合两种机器的各扫描序列信号值的变化及统计分析的结果，SPIO扫描 的最佳序列为SiemensMR机的SWI序列和GE 中文摘要 的T2’序列及GE的ESWAN序列也能在一定程度上反映铁浓度变化趋势， 但是对照组PBS在如上两个序列中信号较低，导致其鉴别有无铁能力的不 确定性。T2WI序列也能在一定程度上反映铁浓度变化趋势，统计结果显 示对于高浓度铁的分辨能力有限。T1Ⅵ序列的信号变化没有能反映铁浓 度的变化。 结论：由于SPIO的增强效果持续时间长，扫描采集的时间段较为充 足，所以更适于应用具有良好信噪比的、非屏气扫描的序列。SPIO扫描 MR机的SWI序YlJSfIGE 的最佳序列为Siemens 的T2+序列及GE的ESWAN序列也能在一定程度上反映铁浓度变化趋势。 第四部分大鼠肝癌模型的建立及MR成像的初步研究 目的：探讨Wistar大鼠移植性肝癌模型的制作方法。 方法：将大鼠CBRH7919瘤株复苏、培养、扩增、传代三次，第三代 瘤细胞用做接种细胞株。将瘤株浓缩成稀糊状悬液备用。将瘤细胞浓缩液 鼠的肝脏两个部位分别移植一次。术前1周、术后连续2周内给每只大鼠 筛选建模成功的大鼠，并从中随机抽取5只大鼠，处死后取出肝脏内肿瘤 进行病理学检查。 结果：20只大鼠中有15只大鼠共长出23个肿瘤样结节，建模成功率为 75％(15／20)。肿瘤大小为5～16mm。病理类型均为肝细胞性肝癌。 结论：通过本