利用PPF1基因延缓叶片衰老和几个水稻生殖相关突变体与研究.pdf

摘 要 (I) 衰老是植物的自然规律，但在合理的生育期的前提下适当延缓衰老，延长叶片的功能期， 提高光合作用，可以协调作物的源库关系，保证品种产量潜力的充分发挥．本研究把来源于 豌豆的通过控制叶绿体发育影响植物发育进程的PPFI基因导入水稻，以期获得衰老延缓的 转基因水稻．同时，本文从茵株互作及菌株状态，脱菌培养，干燥培养、分化和移栽等因素 入手对农杆茵转化水稻过程中的诸多影响因素进行了探讨．归纳如下： 1． 利用农杆菌介导法，把短日豌豆花后特异表达，具有延缓衰老作用的基因脾，转入水 稻．约970块未成熟胚性愈伤组织与农杆茵共培养后，得到了约280块抗性愈伤，从中 分化出抗性绿苗54株． 2．PER，Southern blotting检测结果表明外源基因已经插入受体基因组，其中42株含有 目的基因，阳性率为77．7％．部分阳性植株的叶绿素舍量和光合指标分析表明，多数转 基因植株明显高于对照． ine 3． 在T，代转基因植株中发现一个叶片衰老进程显著受到抑制的转基因株系l 269．PCR、 Southern blotting分析发现该株系为一个单位点插入系，脾，基因位点在转基因株系 内已经纯合，并能够作为单个孟德尔因子在水稻中遗传．RT-PCR分析结果显示PPFI基 因能够在谊株系内稳定表达．生理指标测定证实上三叶叶绿素舍量．净光金谴率和气孔 导度均较对照显著提高． 4． 两个独立时期的叶色观察表明，该株系同位叶的叶色明显较对照青绿，对应叶片的衰老 值差异均在1左右，显示出源足的高光效特征．同时，转基因株系的穗重，千粒重，单 株产量均较对照有显著的提高，结实率提高达极显著水平．这些结果证实胛，基因在 转基因纯系中的表达使植株衰老延缓．作为结果，转基因植株的产量在一定程度上得到 了提高． 5． 以3个籼稻和2个粳稻品种为对象，对农杆菌转化水稻过程中影响转化效率的因素进行 了研究．结果表明，AGLI和EHAl05按一定比例混合共转化和转化前茵体重悬对抗性愈 伤率有显著影响；琼脂粉加倍和超净工作台上风干4h能明显提高抗性愈伤率和分化率； 分化培养基中加入二甲基桠枫(蹦sO)或脯氨酸(pro)可以提高分化率；壮苗时加入 适量的HAA有利于壮根并提高移栽成活率．应用此农杆菌转化系统，获得了一批经PCR 和点杂交鉴定的转基因植株． 关键词：农杆菌介导；PPFl；延缓衰老；叶绿素含量；光合指标；叶片衰老进程； (Ⅱ) 植物的生殖生长是非常重要的发育过程，此阶段的任何异常都可能导致植物的繁衍障 碍．而对于水稻这种以子实作为主要的收获器官的作物来讲，生殖生长显得尤为重要．根据 被子植物生殖胚胎擘，植物的生殖异常可以归结为雄性不育、雌性不育或雌雄不育等几种原 因，此外，花器官的异常发育也是造成植物结实异常的重要原因．近年来。科学家们已经发 现和鉴定了很多的生殖相关突变体或基因，部分生殖发育相关机制也在逐渐明朗．但是，还 有很多的有关生殖发育分子机理还知之甚少，而这些机理的深入探讨有待于更多突变体的发 掘和研究．本文对几个来白于籼稻的生殖发育突变体进行了形态鉴定、解剖观察．细胞现察 和遗传分析等，以期认识突变性状的特性及原因．同时利用SSR标记结合群分法对部分突变 基因进行了染色体定位，希望为水稻的生殖生物学的深入研究奠定基础． 1． 利用一个从籼型恢复系蜀恢202中发现的自然不育突变株作为材料，通过形态鉴定．正 反杂交，胚囊细胞观察和俦粉生物学鉴定，初步确定了该突变体的类型和突变产生的直接原 因．同时，以谊突变性状的遗传特性进行了分析，并利用网上公布的SSR系列引物和相关基 因组序列，对该基因进行了精细的染色体定位．主要结果如下： 52711．88111等杂交时，不能得到杂交种子，即便几种花粉混合授粉，其结实率也仍然为 零：然而，反交平均结实率为36．7X．解剖观察发现，突变体和野生型小花之间没有发 现显著的差异；碘染镜检显示突变体的花粉在外型和染色深度上与野生型接近，可育率 均在85．7％左右．表明谊突变体是一个雌