NPM1基因突变As-PCR检测方法的建立及在白血病中的应用.pdf

摘要 摘要 研究背景和目的： 急性髓细胞白血病(acutemyeloidleukemia，AML)是多能干细胞发生突变所 形成的一类造血系统的恶性克隆性疾病。随着分子生物学技术不断地应用于临 床，越来越多的基因突变检测在白血病诊断、治疗监测和预后评估中得到应用 编码基因是突变率最高的基因之一，其突变状态对白血病患者的生存和预后均 有重要影响。因此，对NPMl基因突变的检测显得尤为重要。本课题旨在建立 检测NPMl基因突变的等位基因特异性PCR方法，为临床检测急性髓系白血病 病人NPMl基因突变提供灵敏、高效而又简便的方法，从而为临床进行急性髓 系白血病的治疗效果监测和预后评估提供实验依据。 研究策略与方法： 1、分别设计并合成5对引物，以健康人淋巴细胞基因组DNA为模板进行 因片段，并分别克隆至载体pEGFP．C1中，作为后续检测的标准品。 理，设计一对特异引物，以四种突变型的pEGFP—C1．NPMl重组质粒为模板，优 化反应体系和反应条件。摸索出该方法检测的最低检测下限，并验证该方法的 可行性。 3、利用AS．PCR方法检测急性白血病患者NPMl基因突变情况，并分析基 因突变与FAB分型、遗传学