PSTEPA和PSgPEG 树脂固定化a淀粉酶及其酶学研究.pdfVIP

PS-TEPA 和PS-g-PEG 树脂固定化α-淀粉酶及其酶 学研究 1* 1 2 1 王峰 ，梁力曼 ，顾正彪 ，崔正刚 1 江南大学化学与材料工程学院，江苏无锡（214122 ） 2 江南大学食品学院，江苏无锡（214122 ） E-mail ：peakwf@ 摘 要：以接枝四乙烯五胺、聚乙二醇链的聚离子长链聚苯乙烯树脂作为载体固定化α淀粉 酶。经研究发现，聚苯乙烯四乙烯五胺树脂(PS-TEPA)对α淀粉酶的最大酶活吸附率在温度 30℃、pH8.0 、固定化时间为8小时的条件下达到83 ％；聚苯乙烯-g-聚乙二醇树脂(PS-g-PEG) 的最大酶活吸附率在温度40 ℃，pH7.0 ，固定化时间为10.5小时的条件下达到60 ％。戊二醛 的参与未能提高酶的固定化量。固定化后，酶催化反应的vmax/Km 比上升，维持稳定活力的温 度和pH值范围拓宽。酶失活半衰期t1/2延长。 关键词：PS-TEPA和PS-g-PEG；α-淀粉酶；固定化；催化；酶学 与自由酶相比，固定化酶具有容易回收、可连续操作、后加工过程简化、酶稳定性增强 等特点[1] 。基于这些优点，固定化酶已广泛应用于食品技术、生物工艺学、生物医学和分析 化学等领域[2] 。酶固定化后催化反应发生的最适温度、最适pH值、最适底物浓度等条件的变 化取决于酶和载体的种类，以及酶的固定化条件和方法[3] 。酶的固定化方法有吸附法、共价 法、包埋法和交联法四大类。吸附法的优势在于操作简单、反应条件温和、载体可反复使用， 不足之处是酶易脱落。主要原因有：一、载体的吸附力弱；二、与载体直接结合的酶蛋白分 子会与载体的刚性表面发生碰撞，从而为酶蛋白分子维持正常(天然)构象造成困难[4]。 α-淀粉酶广泛应用于单糖、双糖和活性多糖的生产过程。国内外报道的α-淀粉酶吸附固 [5] [6] [7, 8] 定化的载体有：壳聚糖 、磁性聚乙烯醇缩丁醛微球 、氧化锆和氧化铝吸附 、超多孔纤 维素[9]、中孔性的硅石[10]、离子交换树脂MB150[11]等。本研究以四乙烯五胺和聚乙二醇 接枝的聚苯乙烯树脂为α-淀粉酶的固定化载体，利用树脂的亲水性多聚离子链增强载体与 α-淀粉酶的相互作用并缓冲酶与载体间的直接碰撞。 1 实验部分 1.1 试剂和仪器 α-淀粉酶：无锡杰能科生物工程有限公司；聚苯乙烯树脂、可溶性淀粉、四乙烯五胺、 戊二醛溶液（25 ％）：国药集团上海化学试剂有限公司，均为分析纯；聚乙二醇（PEG600 ）： 中国医药（集团）上海化学试剂公司，分析纯；氯乙酰氯：上海金山亭新化工试剂厂，分析 纯。 TU-1901 型双光束紫外-可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司。 1.2 实验方法 1.2.1 α-淀粉酶活测定 分光光度法。取 20.0ml 20 g/L 可溶性淀粉溶液于试管中，加入 pH 6.0 磷酸缓冲溶液 5.00ml，在 60℃下预热 5min，加入待测液体样品 1.00ml 或固定化样品 0.5g 振荡反应 5min 后灭活。取反应液 1.00ml 于 5.00ml 稀碘液中，摇匀后测定其在 660nm 波长下吸光度(A) 。 查表求得样品酶液的活性。[12] - 1 - 1.2.2 载体的合成 氯乙酰氯树脂合成 称取 10g 聚苯乙烯树脂置于三口瓶中，加入 120ml 的二氯甲烷溶胀一小时。加入 1.0 ml 氯乙酰氯和适量的 AlCl3 作为催化剂，在通氮气和室温下磁力搅拌反应 4 小时。将合成的氯 乙酰氯树脂用二氯甲烷转移，依次用四氢呋喃、去离子水洗涤