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才思教育考研考博全心全意 中国农业大学食品学院生物化学本科讲义 第十章酶的作用机制和酶的调节 一、酶的活性部位 ㈠酶的活性部位的特点 1、概念：三维结构上比较接近的少数特异的氨基酸残基参与底物的结合与催化作用，这一与酶活力直接相 关的 区域称酶的活性部位。 结合部位：专一性； 催化部位：催化能力，对需要辅酶的酶分子，辅酶或其一部分就是活性中心的组成部分组成，酶活性部位 的氨基 酸数目对不同酶而言存在差异，占整个酶氨基酸残基小部分 亲核性基团：丝氨酸的羟基，半胱氨酸的巯基和组氨酸的咪唑基。 酸碱性基团：天冬氨酸和谷氨酸的羧基，赖氨酸的氨基，酪氨酸的酚羟基，组氨酸的咪唑基和半胱氨酸的 巯基等。 2、特点 55 ⑴ 活性部位在酶分子的总体中只占相当小的部分（1%～2%） ⑵ 酶的活性部位是一个三维实体 ⑶ 酶的活性部位并不是和底物的形状互补的 ⑷ 酶的活性部位是位于酶分子表面的一个裂隙内 ⑸ 底物通过次级键结合到酶上 ⑹ 酶活性部位具有柔性 ㈡研究酶活性部位的方法 1、酶分子侧链基团的化学修饰 ⑴ 非特异性共价修饰：活力丧失程度与修饰剂浓度有正比关系；底物或可逆的抑制剂可保护共价修饰剂的 修饰 作用。 ⑵ 特异性共价修饰：分离标记肽段，可判断活性部位的氨基酸残基，如二异丙基氟磷酸（DFP）专一性与 胰凝 乳蛋白酶活性部位丝氨酸残基的羟基结合。 ⑶ 亲和标记法 修饰剂的特点：①结构与底物类似，能专一性引入到酶活性部位；②具活泼化学基团，能与活性部位某一 氨基酸 共价结合。 作用机制：利用酶对底物的特殊亲和力将酶加以修饰标记，称亲和标记，相应的试剂称 活性部位指示剂 更多资料下载： 才思教育考研考博全心全意 胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶：TPE 是酶的底物，TPCK 是酶的亲和试剂，当酶与TPCK 温浴后，酶活性丧失， 这种 结合具有空间结构的需求，同时也阻止其他试剂如DFP 结合。对酶活性中心的组氨酸咪唑环进行修饰。 2、动力学参数测定法：通过动力学方法求得相关参数，作出相应判断。 3、X-射线晶体衍射法：如溶菌酶和胰蛋白酶活性中心的测定 4、定点诱变法：改变编码蛋白质的DNA 基因，研究酶活性部位的必需氨基酸。如胰蛋白酶定点突变Asp102 诱 变为Asn102，Kcat 降低5000 倍。 二、酶催化反应的独特性质 ⒈酶反应分为两大类，电子转移；电子、质子或其他基团转移 ⒉催化过程中以活性部位氨基酸侧链上的功能基团和辅酶为媒介 ⒊酶催化反应的最适pH 和温度范围窄 ⒋酶分子结构和活性部位特点利于催化反应： ① 酶分子特定的三维结构维持酶活性部位的构象；活性部位多位于酶分子的狭缝处，利于底物结合和酶构 象的 改变； ② 活性中心存在结合部位，使底物以固有的方式结合在活性部位，多底物反应存在多个底物结合位点，保 证反 应有序进行； ③ 活性部位存在一个以上的催化基团，所以能进行协同催化； ④ 底物结合后，活性部位能诱导底物键能的变化，利于过渡态复合物的形成 三、影响催化效率的有关因素 探讨酶作用高效率的原因及酶促反应的重要中间步骤 ㈠底物和酶的邻近效应与定向效应 普通化学反应—随机碰撞（受浓度、碰撞角度影响） 相当于——社会上的自由恋爱 酶的活性中心—相当于 “婚姻介绍所” 邻近效应提高了酶的活性（ “婚介”）中心底物的浓度（—非婚男女集中） 56 定向效应缩短了底物与催化基团间（ “男女”）的距离 酶的催化基团与底物之间结合于同一分子，使有效浓度得以提高，从而使反应速度增加（成功率）108 倍。 邻近效应实例 ㈡底物的形变和诱导契合 酶构象变化同时底物分子也发生变形 构象的变化，使得酶与底物间产生相互作用，电子云重新排布，电子张力更易于发生反应，形成一个互相 吸 引的酶与底物复合物。 如乙烯环磷酸酯的水解；溶菌酶与底物的结合 羧肽酶催化中的电子云形变 ㈢酸碱催化 酶活性中心提供H+或提供H+受体使敏感键断裂的机制称酸碱催化。 每一分子上氨基酸侧链基团可以为反应提供质子或接受质子从而加速反应的速度。 碱催化图解： 更多资料下载： 才思教育考研考博全心全意 酸催化图解： 影响酸碱催化的反应速率的因素有两个： 1、酸或碱的强度 2、质子传递速率 在中性条件下，His 咪唑基有一半以酸性形式存在，另一半以碱性形式存在；既可以作质子供体又可以作 质 子受体。而