乳制品中三聚氰胺及氰尿酸的HPLC方法研究.pdfVIP

反相离子对高效液相色谱法测定植物性 样品中三聚氰胺的含量 张艳萍 俞远志 傅晓航 （1．浙江科技学院 生物与化学工程学院， 浙江 杭州，310012） 摘 要：建立了高效液相色谱法检测植物性样品中三聚氰胺的方法。样品由 1%三氯乙酸— 乙腈超声提取，加入蛋白沉淀剂进行纯化。色谱柱ZORBAX SB-Aq （250mm ×4.6mm, 5μm ）， 流动相为磷酸-三乙胺溶液，流速为 0.6ml/min 检测波长为 240nm，回收率为 89.8 ∼91.1%， 相对标准偏差在 0.75 ∼1.60%之间。 关键词：三聚氰胺；植物性制品；高效液相色谱法 三聚氰胺（melamine ）简称三胺，学名三氨三嗪，别名蜜胺、氰尿酰胺、三 聚酰胺，主要用于生产三聚氰胺—甲醛树脂[1] 。是一种重要的氮杂环有机化工原 料，广泛用于木材、塑料、涂料、造纸、纺织、医药等行业[2] 。 有关食品及饲料制品中添加三聚氰胺的事件最初报道于我国出口到美国的 小麦蛋白粉和大米蛋白浓缩物所引起的宠物中毒事件，国家质检总局积极响应， 要求对列入法检目录的出口植物源性蛋白及其辅料进行检测。而后，爆发于我国 部分幼儿奶粉所引发的尿结石事件再次使三聚氰胺的检测成为关注热点。我国已 经起草并出台了有关原料乳及乳制品中三聚氰胺的检测标准，但是，检测成本较 高。因此，开发一些低成本的检测方法，满足大多数食品及饲料生产企业的日常 检测需要，是我们所面临的问题。本文建立了 HPLC 法测定植物性原料中三聚氰 胺的含量，该方法简便、快速，成本较低，适合于中小企业的日常检测。 1 材料与方法 1．1 仪器和试剂 1．1．1 仪器和设备 Waters 2695-2996 液相色谱仪；AL204 电子天平（梅特勒仪器有限公司）； FE20 pH 计（梅特勒仪器有限公司）；XW-80A 旋涡混合器（海门市其林贝尔仪 器制造有限公司）SK7200LHC 超声清洗器（上海科导超声仪器有限公司）RC-6 Plus 高速离心机（美国热电仪器有限公司）。 [基金项目]：浙江省分析测试基金项目（2007F70004） [作者简介]：张艳萍（1976-），女，汉族，工程师，主要从事食品分析及功能食品的开发等。 1．1．2 试剂 三聚氰胺由杭州捷尔斯阻燃化工有限公司提供；甲醇、乙腈、辛烷磺酸钠、 三乙胺为色谱级；三氯乙酸、柠檬酸、盐酸为分析纯；水为 Millipore 超纯水， 样品：面粉、米粉、藕粉、大豆粉均购于杭州联华超市。 1．2 实验方法 1．2 ．1 样品的处理 准确称取 2g 试样于 50ml 离心管中，加入 1% 三氯乙酸 10ml 和 10ml 乙腈， 超声提取 10min，再在旋涡混合器上振荡提取 10min 后，以5000r/min 离心 10min。 取上清液 10ml，分别加入2ml 10% 亚铁氰化钾及乙酸锌溶液，振荡混合后，静 置 30min，经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用水定容到25ml 。过0.45μm 滤 膜后，在 HPLC 上分析测定。 1．2 ．3 液相色谱条件 色谱柱：ZORBAX SB-Aq （250mm ×4.6mmi.d., 5μm ）；流动相：磷酸-三乙 胺溶液（0.01mol/L 磷酸溶液，用三乙胺调节溶液 pH=3 即可）；流速：0.6ml/min ； 进样体积：10μl ；柱温：室温（约 15℃） 2 结果与讨论 2 ．1 提取方法的选择 在实验中，尝试用甲醇、甲醇—水、乙腈、乙腈—水、1%的三氯乙酸等试 剂进行了提取，并进行 HPLC 分析。结果表明：单纯的有机相并不能完全将制品 中的三聚氰胺提取出来，而且提取液的杂质含量较高。甲醇—水提取液则比较浑 浊，即使经离心及 0.22μm 滤膜过滤后，仍不能得到改善。最终，选定用 1%三 氯乙酸—乙腈作为提取溶剂，采取超声、旋涡提取等方法保证提取完全。 2 ．2 检测波长确定 通过二极管阵列检测器波长扫描，三聚氰胺在 215 、240nm 处均有最大吸 收，但 215nm 处干扰较大，因此，选择 240nm 作为测定乳制品中三聚氰胺的检 测波长。 2 ．3 流动相的选择