车前子多糖对氧化型低密度脂蛋白致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用.pdfVIP

中文摘要 车前子多糖对氧化型低密度脂蛋白致人脐静脉内皮 细胞损伤的保护作用 摘 要 要疾病之一。对AS防治药物的研究一直是基础和临床研究的 重要课题。高脂血症被认为是AS的高危因子之一，其中氧化 Low 型低密度脂蛋I刍 oxidizeddensity 致AS发生的始动因素，它通过脂质过氧化作用导致内皮细胞 受损、分泌多种细胞活性因子和生长因子，促进平滑肌细胞 增殖、单核细胞粘附、血小板聚集和泡沫细胞形成，最终导 机体的损伤是预防AS发生发展的关键。 现今临床主要应用血管紧张素转换酶抑制剂 ACE—I 、D． 受体阻滞剂、降脂药、超氧化物歧化酶 SOD 等药物治疗，以 试图改善患者受损的内皮功能。但其治疗存在两个主要问题： 1、阻断正常生理功能运行所需的物质；2、大部分药物对肝 脏、肾脏有毒副作用。西方现代医学认为，AS是属于病因未 明的疾病，最好采用缓解和抑制症状为主的医疗策略。中药 作为人类维护健康体系的一个重要组成部分，大多数是天然 药物，符合“返璞归真、“回归自然”的潮流，与生物一心理一 社会医学模式相适应。中国药典记载，车前子为车前科 明车前子不仅具有清肠通便、降低血脂、调节血糖、免疫调 节的功效，还能抑制脂质过氧化物及自由基的产生，并对动 中文摘要 脉血管壁的重构有重要作用。但是否能改善内皮功能损伤尚 不清楚，本实验采用现代技术手段从车前子中提取得到有效 seed 成分车前子多糖 plantain OX．LDL对培养的内皮细胞体外直接损伤，探讨船r尸对损伤血 管内皮细胞的保护作用及可能机制，为AS的防治提供进一步 的理论依据。 一人脐静脉内皮细胞的体外培养及其鉴定 目的：建立简单有效且重复性高的人脐静脉内皮细胞 UmbilicalVeinEndothelial Human 及传代培养技术，并对培养的细胞进行鉴定，为进一步研究 内皮细胞功能提供重要的实验方法。 方法： 1 配制培养液：分别配制含10％和20％胎牛血清 的DMEM培养液，然后加入终浓度为15VEGF、100 ng／ml 代分离培养：取脐带 大于20 cm ，采用I型胶原酶灌注消化 法在脐静脉中分离内皮细胞，用含20％胎牛血清的DMEM培 生长汇合至80％后，胰蛋白酶消化，用含10％胎牛血清的 镜下每日观察细胞形态、贴壁及生长情况；②人第Ⅷ因子相 关抗原抗体免疫组化检测。 结果： 1 HUVECs生长情况及形态学变化：①生长时间： 原代分离的内皮细胞2h左右开始贴壁生长，细胞为扁平多角 形，24h完全贴壁，变成梭形，7～10d细胞融合成单层；传 代细胞分布较均匀，O．5h左右开始贴壁生长，3--5d长成单层， 细胞汇合成典型的铺路石状。②细胞形态：原代培养时，倒 中文摘要 置显微镜下可见细胞呈小三角形、圆形，多数细胞聚集成团。 生长活跃期细胞，呈椭圆形或圆形，边界清楚、胞质丰富， 内含小颗粒。传代细胞较原代细胞生长快，细胞密集，分散 均匀，倒置显微镜下可见细胞呈短梭形或多角形，胞核变圆， 呈铺路石状排列，细胞周围近胞核处可见明显光晕，为典型 的内皮细胞生长特点，可以确定所培养的细胞为内皮细胞。 2 第Ⅷ因子相关抗原抗体免疫组化检测：细胞呈圆形、 椭圆形或梭形，胞浆丰富，胞质内有棕黄色的染色颗粒，细 胞核不着色，呈阳性反应；而对照组 力NPBS液 胞质内无棕黄 色的染色颗粒，呈阴性反应，可进一步确认所分离培养的细 胞是内皮细胞。 结论：血管内皮细胞可从胎儿脐带中利用O．1％I型胶原 酶灌注，在37℃水平摇床上消化10min的方法分离获得，并且 通过原代和传代培养成为细胞系，倒置显微镜下观察到细胞 周围近胞核处可见明显光晕，为典型的内皮细胞生长特点， 可以确定为内皮细胞；并利用人第Ⅷ因子抗原抗体免疫组化 法检测，进一步鉴定证实培养的细胞是血管内皮细胞。 二车前子多糖对氧化型低密度脂蛋白致人脐静脉内皮细胞 损伤的保护作用 伤，观察PSP对其保护作用和探讨其可能的机制。 方法：用MTT方法和化学方法从细胞水平观察OX．LDL对 细胞增殖活性及细胞上清液中一氧化氮 NO 含量和细胞内一 基因mRNA的表达。观察不同浓度的只铲 25mg／L、50mg／L、 中文摘要 100 mg／L 对上述指标的影响。 结果： 1 对细胞增殖率的影响：在OX．LDL损伤的条件 下，细胞增殖率与空白对照组相比明显下降 P O．01 ，低浓度 有显著性差异 P O．05 ；中、高浓度的雕P组细胞增殖率分别 明显差异 P O．01 ，且有一定的剂量依赖性。 1．314-0．39 5．074-0．78 2．834-0．48、1．294-0．31 著 P O．05 ，且有一定