黄鳝抗菌肽制备及其粗提物对黄鳝出血病的保护作用初步及.pdf

四川农业大学硕士论文 摘 要 抗菌肽是近年来研究发现的新一代抗菌剂，在先天性宿主防御系统中起重 要作用。但水生动物抗菌肽的相关研究起步较晚，黄鳝抗菌肽的提取仅本实验 室有部分研究，而其余目前尚未见报道。本文研究黄鳝黏液、皮肤等组织粗提 物的抗菌活性，在此基础上进一步分离纯化黄鳝黏液抗菌肽，并观察黄鳝黏液 抗菌肽粗提物对半致死剂量嗜水气单胞菌∽．hydrophila)感染黄鳝的保护作用。 共分三个试验，研究内容如下。 试验一、黄鳝各组织抗菌肽的粗提 本试验采用Tris．HCI提取法和乙酸提取法从诱导后黄鳝黏液、血液、皮肤、 肝脏、脾脏、肠道和肾脏组织中分离抗菌肽粗提物。结果表明，从黄鳝黏液、 皮肤和肠道成功分离出具有抗菌活性的粗提物。用嗜水气单胞菌和沙门氏菌作 为指示菌，平皿法检测，结果显示黄鳝黏液和肠道提取物的抗菌效果明显。在 其血液、肝脏、脾脏、肾脏提取物中未观察到抑菌圈。 试验二、抗菌肽粗提物对出血性败血症病理模型黄鳝的保护作用 本试验分别观察不同浓度黄鳝黏液抗菌肽粗提物(160mg／mL、80mg／mL、 40 为160mg／mL、80mg／mL和40mg／mL的黏液抗菌肽粗提物对黄鳝进行腹腔注射， 黄鳝的死亡数分别降低到0、2尾和3尾。通过病理组织学观察发现，腹腔注射 160mg／mL黏液抗菌肽粗提物能有效地减轻嗜水气单胞菌引起的黄鳝肝脏、脾 脏、肾脏、肠道等重要脏器的损伤。提示，黄鳝黏液抗菌肽粗提物对嗜水气单 胞菌引起的出血性败血症的黄鳝具有保护作用。 试验三、黄鳝黏液抗茵肽的分离纯化 G．50凝胶对黄鳝黏液抗菌肽粗提物进行初步纯化， 本试验利用Sephadex S阳离子交换进行离子交换层析对其进一步纯化。经 再用Macro．PrepHigh G．50凝胶过滤色谱分析，收集到三个紫外吸收峰的组分，通过抗菌活 Sephadex 性筛选，第3个吸收峰有抗菌活性；其抗菌活性样品经Macro Hi曲S阳离 Prep 子交换层析进一步分离纯化，并对收集到的两个紫外吸收峰进行抗菌活性筛选， 发现第2个吸收峰有抗菌活性。将该活性组分进行SDS．PAGE电泳，电泳结果 四川农业大学硕_上论文 显示为单一条带，说明分离到的黄鳝抗菌肽已达到电泳纯，分子量为8400Da。 关键j闻：黄鳝抗菌肽分离纯化出血病保护作用 四JII农业入学硕士论文 英文摘要 albusantimicrobial Separation，purificationMonopterus ofthecrude peptide，thepreliminarystudy antimicrobiall a场跖slDHS emtpeptidepprotectin2epMonopterusonopterusa from challenge A．hydrophUa Xu By Qinzhi(Aquaculture) DirectedProf．Zhou by Dinggang Abstract： Antimicrobial a discoveredofantimicrobial