鼠抗人PD-L1单克隆抗体的研制及其生物学功能和研究.pdfVIP

鼠抗人PD—LI单克降抗体的研制及茛生物学功能的研咒 中史摘要 鼠抗人PD-L1单克隆抗体的研制及其生物学功能的研究 中 文摘要 细胞的活化除了需要通过APC递呈MHC-抗原肽给抗原特异性T细胞提供第一信号 外，还需要一系列协同刺激分子提供第二信号，才能使T细胞达到生理活化阂值产 生正常的免疫应答。如果缺少共刺激分子提供的第二信号，将会导致T细胞的无反 应眭或特异性免疫耐受甚至凋亡。正性和负性协同刺激信号的调节及两者之间的平 衡在机体免疫应答的整个过程中起着重要的调节作用。 断扩大，其中PD—L1是新近发现的共刺激分子之一。PD—L1具有igv和IgC样区、 跨膜区和胞浆区，具有广泛的组织表达谱，甚至在一些肿瘤细胞株上也有较高表达。 PD．1是PD-LI的一个抑制性受体，主要表达在活化的T细胞上，PD．IIPD—LI途径 在抑制T细胞增殖的同时，也影响很多细胞因子的分泌。同时，PD—LI在肿瘤细胞 上的高表达，能减弱机体抗肿瘤免疫应答的作用，可能与肿瘤的免疫逃避机制密切 相关，阻断此途径可增强机体的抗肿瘤免疫应答。大量研究显示PD-LI在机体免疫 应答的调控方面发挥着重要的作用，PD—LI可能会成为肿瘤治疗中新的靶分子。更 为重要的是，目前关于PD-LI对T细胞的生物学作用，不同的研究小组报道了截然 不同的结果，一些研究表明。PD-LI还能作用T细胞促进其显著增殖和IL．2的分泌， 具体机制尚不明了。 免疫原免疫BALB／e小鼠，采用B淋巴细胞融合技术，将反复免疫后的小鼠肿脏细 细胞，以转空质粒的对照细胞L929／mock作为阴|生对照细胞，经免疫荧光标记分析 及抗体分泌阳性杂交瘤细胞的反复筛选，并经多次克隆化培养，最终获得1株持续、 稳定分泌鼠抗人PD．L1单克降抗体的杂交瘤细胞株，命名为10E10。经决速定性试 学分析。杂交瘤细胞株体外连续传代(40代)培养，液氮冻存半年后复苏，仍生长 良好，稳定分泌抗体。 鼠抗人PD-L1单克隆抗体的研制及茛生物学功能的研究 中文摘耍 运用成功制各的单抗，我们探讨了PD．L1信号对人外周血T细胞和Mo．DC的 生物学行为的影响。单抗10E10能阻断PD-l-PD．L1通路，通过下调负性信号的作用， 在体外刺激T细胞的增殖，同样能够促进双向混合淋巴细胞反应，由此证实所获的 上表达的PDoLl分子，并通过逆向信号抑制DC的成熟，表现为下调DC表面的正 性共刺激分子的表达以及提高DC的抗原吞噬能力。肿瘤细胞的体外实验表明，单 抗10E10通过阻断肿瘤细胞上表达的PD-L1分子与活化T细胞上相应受体之间的相 互作用，进而抑制活化T细胞的凋亡，提高其对肿瘤细胞的杀伤效应。 试剂盒。以此方法检测细胞裂解液中的PD—LI蛋白和商品化PD．LI标准蛋白．所绘 制的工作曲线均有良好的线性关系。 综上所述，本研究成功制各了一株特异性鼠抗人PD．L1功能型单克隆抗体，并 肿瘤免疫逃逸中的作用，证实了PD-L1信号在免疫应答的不同阶段和不同的免疫微 环境中发挥的不同生物学作用，并为进一步寻找另一个未知受体奠定了物质基础， 此外，应用单抗制备的酶联免疫检测试剂盒，对于研究可溶性PD．L1分子具有重要 的价值。 关键词：PD—L1，PD—l，单克隆抗体，共刺激分子 硕士研究生：孙静 导 师：张学光 H !塑型竺!!!坐些塑业坚坚!!：!!婴!!竺!竺!竺!些塑型!型z苎坚!唑g型坐!竺!堕坚 ofamouseanti．humanPD．Llmonoclonal Preparation and ofits function antibodystudy biological Abstraet itwas in forT activationhas Since