食管鳞状细胞癌的分子细胞遗传学与研究.pdf

《》中¨J大学博士论文 食管鳞状细胞癌的分子细胞遗传学研究 食管鳞状细胞癌的分子细胞遗传学研究 专业：病理学与病理生理学 博士生：徐方平 导师：文剑明教授 中山大学附属第一医院病理学教研室 摘要 食管癌是一种人类常见的消化道恶性肿瘤。我国是食管癌高发地区，其死亡率 和病例数居世界之冠。食管鳞状细胞癌(ESCC)为我国食管癌的丰要病理学类型， 它的发病率较高，就诊时常己到晚期，手术后5年生存率小于30％，危害极大。因此 深入研究食管癌的病因及发病机制，对食管癌的预防与治疗有着迫切与重要的价值。 食管癌的发生与发展与同其它肿瘤一样，是一个多因素作用、多基因参与、多 阶段发展的疾病；基因不稳定性是其本质。基因不稳定性在细胞遗传学上表现为染 色体的异常，如染色体易位、扩增和缺失等：在分子水平上表现为错配修复基因功 能的丧失或异常、原癌基因激活、抑癌基因失活以及凋亡相关基因失衡等：涉及到 细胞生长、增殖、分化和凋亡等过程的失调控。而最近的分子生物学研究也进一步 证实ESCC的发生、演进是多种基因突变累积的结果，其中癌基因激活及抑癌基因失 活发挥着关键作用。 基因扩增(geneamplification)是原癌基因激活主要方式之一，其靶基因的扩增 和过度表达为肿瘤细胞生长提供选择优势，促进了肿瘤的发生与演进。基因缺失 loss)是抑癌基因失活的一种重要方式。抑癌基因缺失使它丧失了在细胞周 (gene 期、细胞增殖和细胞稳定维持等多方面的调控功能，增加了机体的肿瘤易感性，从 而促进了肿瘤的发生。 食管癌细胞系及食管癌组织中均存在着复杂的染色体改变，丰要表现为肿瘤染 程》中山大学博士论文 ☆管鳞状细胞癌的分子细胞趱传学研究 色体特异部位的扩增和缺失，导致了癌基因激活及抑癌基因失活。因此染色体高频 扩增区很可能存在癌基因并由于扩增而激活；而频繁出现基因等位缺失的染色体区 域可能存在着肿瘤抑癌基因并失活。所以从筛选和定位染色体特异区域的扩增和缺 失入手，可以寻找、确定与ESCC相关的扩增的癌基因以及缺失的抑癌基因。然而 ESCC涉及到多个癌基因及抑痛基因的变化，如何筛选与寻找与ESCC相关的扩增的 癌基因以及缺失的抑癌基因，是肿瘤研究重要课题之一。 全面了解肿瘤染色体变化、定位检测染色体位点和大量筛选肿瘤相关基因方面具有 快速、简便的优点，三者的结合能更好地筛选和验证新的候选癌基因和抑癌基因。 因此，同时使用CGH，FISH，TMA利免疫组织化学技术(IHC)等其它检测手段， 可以从DNA和蛋白表达层面探讨基因的变化，对进一步全而认识ESCC的分子遗传 学特征及其致癌机制有深远的促进作用。 本研究目的是寻找、定位与ESCC相关的扩增的癌基因以及缺失的抑癌基因，并 探讨他们在ESCC发病过程中的作用及可能的机制。首先，我们采用CGH对ESCC 进行全基因组扫描，锁定高频染色体扩增与缺失区段；进一步用FISH和免疫组化 的方法在含大宗病例的组织芯片上，筛选和验证与ESCC有关的扩增的癌基因和缺 失的抑癌基因。再结合临床病理资料，力图揭示ESCC的某些分子特征，为全面和 深入认识ESCC分子细胞遗传学致癌机制，提供研究基础。本文研究分为4部分： 一、比较基因组杂交技术检测食管鳞状细胞癌分子遗传学改变 收集31例新鲜ESCC组织，包括癌组织和癌旁正常食管粘膜组织。提取全基因 组DNA，采用缺口平移法，分别标记以光谱绿dUTP和光谱红dUTP，制备成探针： 与正常人的分裂中期染色体杂交；荧光显微镜下观察，CGH软件图像分析，，：lJN出 差异区带。再结合临床病理资料，进一步分析ESCC扩增及缺失与临床病理资料之 间的联系。结果发现： 20q(52％)、5p(48％)、lq(45％)、12p(39％)、1lq(39％)、18p(35％)、6q(29％)、 《》中lIJ大学博士论文 食管鳞状细胞癌的分子细胞遗传学研究 5q13-5q14。而且1q扩增与8p缺失都与ESCC的远处转移有明显相关性。 二、ESCC染色体20q及3q高频扩增区癌基因的筛选与验证 收集了食管鳞状细胞癌患者手术切除标本221例，制作出包含364(156例