肾小球疾病发病机制的系列与研究.pdf

中山大学博士论文 中文摘要 肾小球疾病发病机制的系列研究 第一部分：VEGF对大鼠肾小球内皮细胞紧密连接的影响及机 制 第二部分：IgA肾病患者血清IgAl对足细胞粘附性的影响及 机制 博士研究生：叶增纯 导 师：娄探奇’教授 专 业：内科学(肾脏病学) 中文摘要 VEGF对大鼠肾小球内皮细胞紧密连接的影响及机制 第一章VEGF对肾小球内皮细胞紧密连接及通透性的影响 研究背景 糖尿病肾脏疾病(diabetickidneydisease，DKD)是糖尿病最常见和最严重 的微血管并发症之一。持续高血糖环境引起各种细胞因子和生长因子的大量产生 在DKD的进展和恶化中起着关键作用。其中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth 研究证实VEGF在糖尿病早期蛋白尿的产生中发挥着重要的作用。 中山大学博士论文 中文摘要 endothelialcell 近年研究发现，肾小球内皮细胞(Glomerular s，GEnCs)之 间的连接破坏可能是导致肾小球通透性增高，以致蛋白漏出增多的重要机制之 一。紧密连接(tightjunction，TJ)是内皮细胞最主要的细胞间连接之一，维持 (adaptor 来，共同调控细胞之间的连接。研究证实紧密连接受损可导致内皮细胞间的通透 性增高，而其受损可能由细胞连接相关蛋白表达量和／或磷酸化的改变，或者是 连接蛋白成分位置迁移而引起。肾小球内皮细胞紧密连接的破坏和通透性的增 高，是蛋白尿产生、组织炎症细胞浸润和肾脏病进展的重要机制之一。 研究目的 响。 研究方法 1．在Transwell小室上培养大鼠肾小球内皮细胞至融合细胞单层，经无血清培 electrical 后测定跨内皮细胞电阻抗(Transendothelialresistance，TER) 和FITC-BSA漏出率，以检测GgnC单层通透性； 30min后，分离细胞膜和细胞 2．不同浓度VEGF(0，5，50ng／m1)刺激GEnC 浆蛋白，Western 布情况； 30min后，免疫荧光法检测紧 3．不同浓度VEGF(0，5，50ng／m1)刺激GEnC 密连接蛋白ZO-1、Occludin在细胞内的破坏和重分布情况。 结果 1．TER结果显示，VEGF可以引起肾小球内皮细胞单层跨内皮细胞电阻下降，且 呈浓度依赖性；FITC-BSA漏出率结果显示，VEGF可以引起肾小球内皮细胞单层 通透性增加，FITC-BSA漏出增加，且呈浓度依赖性。 2．Western blotting结果显示，VEGF刺激肾小球内皮细胞后导致紧密连接蛋 白ZO一1、Occludin由细胞膜向细胞内重分布，紧密连接受到破坏； ll 中山大学博十论文 t{·文摘要 3．免疫荧光结果显示，VEGF刺激肾小球内皮细胞后导致紧密连接蛋白ZO-1、 Occludin由细胞膜向细胞内重分布，紧密连接受到破坏。 结论 重分布，导致内皮细胞紧密连接破坏，细胞问通透性增高。 第二章P13K／Akt信号通路在VEGF破坏肾小球