南蛇藤素抑制TLR4%2fMMP-9通路抗类风湿关节炎滑膜细胞侵袭研究.pdf

IIllIIIIILllUIlllI III II IIl Y2419868 目 录 符号说明…………………………………………………………1 中文摘要………………………………………………………………3 英文摘要………………………………………………………………．9 ．j‘．J-- 刖 吾…………………………………………………………………………16 第一部分南蛇藤素对LPS诱导的RA—FLS侵袭的影响…………21 1材料…………………………………………………………………………21 1．1滑膜组织来源…………………………………………………………………21 1．2主要试剂………………………………………………………………………21 1．3主要仪器设备…………………………………………………………………22 1．4主要试剂的配置………………………………………………………………22 2方j．去…………………………………………………………………………23 2．1RA．FLS的分离和培养…………………………………………………23 2．2FACS鉴定人RA．FLS表面标志……………………………………………23 2．3MTT法检测RA．FLS活力……………………………………………………24 2．4细胞迁徙实验…………………………………………………………………24 2．5细胞侵袭实验…………………………………………………………………24 2．6统计学处理…………………………………………………………………25 DI010……………………………………………………………25 3结果……0 3．1RA．FLS体外培养的形态学观察及鉴定……………………………………25 3．2Cel对RA．FLS活力的影响……………………………………………………26 3．3Cel对LPS诱导的RA．FLS迁徙与侵袭力的影响……………………………27 4讨{仑………………………………………………………．………………．．30 第二部分南蛇藤素抑制舳一9介导的RA—FLS侵袭的研究…．·34 1材料…………………………………………………………………………34 1．1主要材料及试剂………………………………………………………………34 1．2主要仪器设备…………………………………………………………………35 1．3主要试剂的配置………………………………………………………………35 2方法…………………………………………………………………………36 2．1RA．FLS的分离和培养…………………………………………………………36 2．2细胞迁徙与侵袭实验…………………………………………………………36 2．3qRT-PCR检测…………………………………………………………………36 2．4Western blot检测……………………………………………………………38 2．5脂质体转染MMP．9siRNA……………………………………………………40 2．6ELISA………………………………………………………………………40 2．7明胶酶谱实验…………………………………………………………………41 2．8统计学处理……………………………………………………………………41 3结果…………………………………………………………………………41 3．1 3．2Western 3．3明胶酶谱检测Cel对MMP．2及MMP．9活性的影响…………………………45 3．4 3．5MMP．9 siRNA转染对RA—FLS迁徙的影响………………………………47 3．6MMP．9 siRNA转染对RA．FLS侵袭的影响………………………………47 4讨论…………………………………………………………………………50 第三部分南蛇藤素抑制，n尿4栅一心通路活化下调M^佃一9转录的 研究…………………………………………………………………………………54 1材料…………………………………………………………………………54 1．1主要材料及试剂………………………………………………………………54 1．2主要仪器设备…