重组大肠杆菌热稳定性过氧化氢酶的纯化及性质研究.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 ’( )! .’ ) # 年 月 $$ % !#$ %’()(*(+$ ,-$ *+,- $$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 重组大肠杆菌热稳定性过氧化氢酶的纯化及性质研究 王凡强 王正祥 邵蔚蓝 刘吉泉 徐成勇 诸葛健 （江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室 无锡 /!$#% ） 摘 要：将产热稳定性过氧化氢酶的重组大肠杆菌培养后菌体破碎得到的粗酶液经热处理、 硫酸铵分级沉淀、 离子交换层析、 疏水作用层析、 567648-9:;-= 74$ ?@AB-9# /%C /$ A:-,D( 8+4 9-B-=$$ ?E /$C#$ 凝胶层析提纯后得到电泳纯的酶，比酶活达到/%0FCGH。此酶的最适温 度为1$I ，最适9?1 J$，在%$I保温%$G@, 酶活力基本不变，在 9?# K 3 的范围内比较稳定。 2 / 2 / N N N 此酶的 和 分别为 和 · · 。 的 、 、 !G G;= 1 J1GG’(C L 1 J3GG’( G@, GH /GG’(C L M, O; P, 可使该酶完全失活， 、 、 、巯基乙醇对酶活力有抑制作用， 的 不 QR. .;. .; 8 S $GG’(C L 65T7 # ! 影响酶活性。 关键词：重组大肠杆菌，过氧化氢酶，纯化，性质 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） U 7 $$$/4%$0 $$ $#4$#!34$% 过氧化氢酶（ ： ）催化 :DB’H-, 9-B’=@- :DB’H-, 9-B’=@- ’=@’B-+VW;X- 6R /) //) /) % ? S 分解为 和 的反应，几乎存在于所有好氧生活的生物体内，具有清除自由基、保护 ? S S 细胞免受S 2 损害等保护生物机体的功能。过氧化氢酶广泛用于生物、医药、临床和食品 中的某些分析测定；在食品和乳制品工业、纺织工业、制浆和造纸工业、医疗器械的消毒、 ［，］ / 葡萄糖酸的生产等方面也有越来越多的应用 。商品化的过氧化氢酶主要来源于牛肝、 微球菌和黑曲霉，最近 公司推出了遗传修饰生物（ ）生产的过氧化氢酶商 .’Y’ZDG-X [PS 品，用于纺织品的漂白工艺中。 酶的热稳定性及贮存稳定性是它能否大规模生产从而商品化的关键。从 /03% 年开 始，国内外都开始进行热稳定性的过氧化氢酶的筛选工作，发现了几种嗜热菌产生的过氧 ［，，，］