草鱼(Ctenopharyngodon+idella)对亚硝酸氮、氨氮和温度胁迫的生理响应.pdf

草鱼(cl细咖叼嗍渺而啪触鲥趾)对亚硝酸氮、氨氮和温度胁迫 的生理响应 摘要 草鱼是我国国内广泛养殖的一种淡水鱼类，但是在养殖过程常常会面对多种 多样的环境胁迫而产生应激反应。本研究通过在亚硝酸盐，氨氮和温度胁迫下草 鱼几种应激反应相关基因的表达，初步探讨了环境胁迫下草鱼的生理响应。 1．亚硝酸盐胁迫对于草鱼(C伽哪明哪咖触加)剃和却如基因表达的影 响 在草鱼的养殖生产中，由于精养和工厂化养殖的扩大，水体中常含有较高浓 度的亚硝酸盐。本实验通过测定草鱼的24h半致死浓度，sDd和庇踊如的表达模 式研究了草鱼在分子生物学水平上对高浓度亚硝酸盐暴露的响应。经过半致死实 h 验确定的亚硝酸盐24LC50为445 mg／L。实验中草鱼被置于5个浓度的处理组 中(50，87，151，263，400 mg／L)，取肝脏，肠和鳃来测定sDd和蚴9D的表达情况。 经过高浓度的亚硝酸盐暴露处理，舳d和办妒如的表达受到了显著的上调，但是 在不同组织中的表达模式不同。这些结果指出，高浓度的亚硝酸盐能够诱导应激 蛋白的表达，并且sod和卸9D可以作为评估草鱼氨氮暴露水平的良好指标。 2．急性氨氮胁迫对于草鱼(锄l哪叼嗍尹砌阴触疆趾)舳d和她P如基因表达及鳃 部结构的影响 本实验通过测定草鱼的24h半致死浓度，鳃的细胞结构以及sDd和^印9D 的表达模式研究了草鱼在组织学和分子生物学水平上对高浓度氨氮暴露的响应。 h 经过半致死实验确定的氨氮24LC50为243 mg／L试验中草鱼被置于5个浓度的 处理组中(50，72，104，151，220 mg／L)，之后取鳃组织进行组织切片分析，取肝 脏，肠和鳃来测定册d和坳9D的表达情况。经过高浓度的氨氮暴露处理，鳃组 织的细胞排列和结构产生了明显的变化，并且s耐和却9D的表达受到了显著的 上调，这些结果指出，高浓度的氨氮能够损害鳃部的细胞结构并且诱导应激蛋白 的表达。这个结果同样显示出，sDd和办印9D可以作为评估草鱼氨氮暴露水平的 良好指标。 3．草鱼(o细啦口删蝴触撇)却加和却如对温度急性变化的响应 在夏季苗种运输及养成期问，高温会诱发草鱼(C钯门D础口唧馏D如船fc拓砌) 产生疾病，导致大规模死亡，因此研究高温胁迫对草鱼生理影响具有重要意义。 热休克蛋白的诱导表达是生物抵御温度胁迫的重要机制。结合耗氧率和死亡率数 据，研究不同对温度条件下热休克蛋白的表达模式可了解草鱼对温度的耐受和适 应机理。在本研究中，为分析草鱼热休克蛋白(矗印7D和却如)对急性温度变 化的响应，将在20℃下驯化的草鱼在7个实验温度(22，24，26，28，30，32， 34℃)中热激3h，然后20℃恢复2 h，取肝脏，肌肉和鳃测定向印7D和．12sp90 表达。结果表明，却加和却9D表达量随着温度升高而上升，当温度达到34℃ 时，肌肉与鳃热休克蛋白表达量显著下降。结合以往草鱼耗氧率和死亡率数据进 行分析，发现草鱼耗氧率、热休克蛋白表达和死亡率之间的关系符合氧限制热耐 受理论(OCLTT)，证明了OCLl_r理论在淡水广温性鱼类中的适用性。基于 OCU了理论，草鱼生理临界温度为~28℃，当温度超过28℃，热休克蛋白表达 所需能量主要由无氧代谢提供，进而导致体内氧自由基增加，影响免疫应答，造 成草鱼大规模患病和死亡。因此在夏季运输过程中，应避免将草鱼暴露于长期高 温(28℃3h以上)中。 4．鲤鱼(铆搬砌)却加基因的克隆及序列分析 根据GenBaIll(中己提交的鱼类加p7D序列保守区域设计简并引物得到 cDNA 核心片段，通过RACE技术获得3’及5’末端，经拼接后得到鲤鱼办sp7D 全长2303 bp，ORF为1932bp，还包括137bp的5’UTR，234bp的3’UTR。 编码643个氨基酸，预测相对分子量为70．5