水稻RAD21%2fREC8家族基因分离及功能分析.pdf

摘要 摘要 染色体黏着是有丝分裂和减数分裂的关键事件，是保证姊妹(或同源)染 色体正确分离并分配到子细胞中的关键调控环节之一，它建立于细胞分裂前的 S期将新复制的姊妹染色体紧密联系在一起。来自酵母的研究结果已经证明姊 妹染色体之间的黏着是由多亚基的蛋白质复合体一黏着素所介导的。在芽殖酵 黏着素的组成与有丝分裂中的相似，只是Sccl被其减数分裂特异的Rec8变体 所替换。目前，已经从高等真核生物线虫，果蝇，人，鼠以及拟南芥中分离到 了黏着素相关的基因，但是对于这些基因在高等真核生物特别是植物细胞分裂 中的功能还知之甚少。即使在酵母中人们对于减数分裂和有丝分裂过程中有关 染色体黏着与分离的许多基本问题仍然不清楚，而且许多现象表明减数分裂的 详细机制在各种生物中存在重大差异。 我们通过同源克隆的方法证明水稻(和拟南芥)基因组编码4个 RAD21／REC8．1ike基因。这4个基因均以单拷贝存在，在核苷酸水平上没有相 似性。它们所编码的蛋白质的相似性主要局限于其N一末端结构域和C一末端结构 域。这4个蛋白质的中间区域没有(或者仅有极低的)相似性，但是中间区域 都含有潜在的核定位信号，PEST序列，分离酶的识别序列以及多个磷酸化位点。 半定量RT-PCR，原位杂交以及Western杂交结果显示这4个基因都在生殖 器官中优势表达，但是它们在花发育过程中的表达动态是不同的。OsRAD21一J『 则在雌雄蕊形成时期表达最强，之后逐渐降低。这些结果暗示这4个基因的功 能可能是不同的。 的染色体上，其分布动态表明这两个蛋白可能都参与了有丝分裂姊妹染色体之 过程中表达，同时水稻花粉的发育成熟要经过两次有丝分裂，推测OsRad21—3 蛋白可能参与这两次有丝分裂过程姊妹染色体之间的黏着。OsRad21．4则特异 地定位于减数分裂前间期到中期I的染色体上，说明它可能特异地介导减数分 裂过程姊妹染色体之间的黏着。与其它已知的Rad21／Rec8一like蛋白不同，不论 在有丝分裂还是在减数分裂过程中，OsRad21—2蛋白都不定位于染色体上而是 特异地定位在核仁中，并且它的动态变化与核仁重建和解体的动态规律在时间 水稻RAD21／REC8家族基冈的分离与功能分析 上也是相一致的，这说明OsRad21—2是一种新的核仁蛋白质而与染色体的黏着 无关。 OsRAD21-4 RNAi转基因水稻植株的花粉活性受到严重影响，种子结实率 降低。雄性减数分裂过程中染色体出现多种异常行为：前期I染色体异常凝集； 同源染色体提早分离；染色体出现片断化。进一步的FISH实验结果证明RNAi 株系中同源染色体配对和姊妹染色体臂的黏着均发生异常。因此，OsRad21-4 是酵母Rec8的同源蛋白，是正确的减数分裂所必需的。 与表达分析和功能分析所得的结果相一致，进化树分析可以将 妹染色体黏着；(2)Rec8亚家族，参与减数分裂染色体黏着；(3)Rno亚家族， 目前仅发现于高等植物中，是一种核仁蛋白质而与其它的Rad21／Rec8一like蛋白 的功能不同，可能不参与染色体之间的黏着。 关键词：水稻；黏着素；有丝分裂；减数分裂；Rad21：Rec8 II ABSTRACT CharacterizationandFunctionalof Analysis RAD2l／REC8．1ikeGenesinRice LiangranZHANG(Botany) DirectedProfessorTaiWANG by ProfessorCHONG Kang Sisterchromatidcohesionisessentialforaccuratechromosomeand